子非鱼 发表于 2016-8-5 15:10:47

PEG聚沉，先8%后5%的原理是什么？

RT：PEG6000两次聚沉，先后浓度不一样的原理是啥？因为我3次提血清exo，8%聚沉后可见沉淀，到5%的时候就沉不下来了（偶尔也有那么一次沉下来过），后来改成两次8%的聚沉就都能沉下来，但是我不知这样做对不，希望大家解惑哈~!{:3_52:}

hzangs 发表于 2016-8-5 22:53:02

浓度越低。 杂蛋白越少

zqlhiiaxyz 发表于 2016-8-8 10:05:10

楼主，你8%沉淀后，用多少PBS稀释的？后来的5%是过夜沉的还是几个小时？

子非鱼 发表于 2016-8-15 23:34:44

hzangs 发表于 2016-8-5 22:53
浓度越低。 杂蛋白越少

谢谢！深刻体会到了沉淀法提取exo做蛋白的艰难了，感觉so hard，我要停下来了，等有超离了再说吧:(

子非鱼 发表于 2016-8-15 23:37:31

zqlhiiaxyz 发表于 2016-8-8 10:05
楼主，你8%沉淀后，用多少PBS稀释的？后来的5%是过夜沉的还是几个小时？

1ml的血清25mlPBS稀释，25ml的16%PEG进行1次聚沉；然后沉淀25mlPBS稀释，等体积16%PEG进行2次聚沉，过夜沉，我试过2h（忘记在哪看的2h这个点了）完全不行。

子非鱼 发表于 2016-8-15 23:46:45

hzangs 发表于 2016-8-5 22:53
浓度越低。 杂蛋白越少
话说回来，8%的浓度是让exo沉的，之后PBS一溶解相当于又回到原点了，5%再一次聚沉，浓度降低，杂蛋白少了的同时，是不是也损失相当一部分exo了（不知描述清楚没）？如果是，那二次沉淀就属于“伤敌一千，自损八百”了，自杀式的提取啊......

dawnzhao 发表于 2017-3-24 23:01:29

您好！楼主，我现在也在做两次PEG沉淀，您做的效果如何？继续后面的生物学实验了吗？谢谢啊 我做wb感觉还好啊

范范 发表于 2017-4-30 21:15:56

请问8%+5%PEG的方法是最后不超离吗？有没有protocol可以学习一下呢，谢谢啦

五月灼蓁 发表于 2017-5-15 17:25:57

楼主能不能告知下先8%后5%的步骤，谢谢
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