grapetian 发表于 2016-9-20 17:29:10

新鲜出炉的电镜求鉴定

请大神们帮我鉴定下电镜图,为什么我同一个样品做出来的囊泡大小都有,30nm-150nm不等,还有几个200nm左右的。 形态也各异,什么样的都有。样品是细胞上清液超离得到的。另外背景也不干净,电镜老师说是蛋白污染。还有丝状的不知道是什么?

grapetian 发表于 2016-9-21 16:06:04

Johnny 发表于 2016-9-20 17:47
那些小的是外泌体,大的是shedding vesicle了。背景不干净确实是蛋白的污染。

总体来说,你的电镜效果还是 ...

那要怎么样可以除去蛋白污染,让背景干净点?pbs多洗几遍吗?

jzhou65 发表于 2016-9-24 00:11:53

请问您具体是怎么提取的啊?谢谢!

Odie 发表于 2016-9-24 12:46:10

估计你用的离心法测的吧。会有很多细胞碎片等杂质(提取试剂盒本人测试效果不错,大小比较均一),制样的时候也要保证干净(包括上样片),最后一个是适宜的浓度。

grapetian 发表于 2016-9-26 12:24:08

jzhou65 发表于 2016-9-24 00:11
请问您具体是怎么提取的啊?谢谢!

超速离心法提取的收集细胞培养上清,300g 10min2000g 20min10000g 30min100000g 1h, pbs洗一遍 100000g 1h

grapetian 发表于 2016-9-26 12:37:14

Odie 发表于 2016-9-24 12:46
估计你用的离心法测的吧。会有很多细胞碎片等杂质(提取试剂盒本人测试效果不错,大小比较均一),制样的时 ...

对啊 我用的超离,你用什么试剂盒提取的?

中义 发表于 2016-9-29 12:49:08

应该在去上清时彻底一点,留上清时保守一点,这样有助于减少蛋白污染。

小七果果8 发表于 2016-10-1 10:46:35

请问如果暂时没有100000g的离心机可以用,后面几步用8000g的是不是完全没有意义,根本不可能提出外泌体,求助~

五仁 发表于 2016-10-9 23:33:35

楼主超速离心的时候,最后用pbs重悬,我看文献上说用20微升到50微升经行,但是原本离心管壁上就有液体,怎么 处理?50微升的PBS加入到那么大的超速离心管中,就和大海捞针一样,怎么重悬?感谢楼主能够排疑

grapetian 发表于 2016-10-10 13:14:12

五仁 发表于 2016-10-9 23:33
楼主超速离心的时候,最后用pbs重悬,我看文献上说用20微升到50微升经行,但是原本离心管壁上就有液体,怎 ...

不是啊,你离心的话肯定是pbs要加满超离管的,最后一步是加20-30ul重悬后做鉴定
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