huang_0207 发表于 2017-5-10 10:46:25

外泌体miRNA提取用什么？

最近在做外泌体miRNA方面实验，想问各位大神们，大家都是用什么方法提取外泌体中的miRNA，是用哪家的试剂盒还是用trizol？如果用trizol的话，miRNA的含量会不会低后续做qPCR等会不会受到影响？

微微的小龙虾 发表于 2017-5-22 16:36:55

张宏道 发表于 2017-5-11 09:13
我觉得这个问题需要比较全面的进行比较和分析，因为trizol结合醇沉淀的方法会有其局限性，但其他的方法也 ...

你好，请问你做的是细胞还体液的 miRNA？能不能发我一份步骤

hzangs 发表于 2017-5-10 10:57:39

有朋友用TRIZOL LS。 跑qPCR 可以

huang_0207 发表于 2017-5-10 11:25:58

hzangs 发表于 2017-5-10 10:57
有朋友用TRIZOL LS。 跑qPCR 可以

谢谢hzangs大神:lol

张宏道 发表于 2017-5-10 15:05:31

使用的trizol，最经典的方法，不会有问题。

huang_0207 发表于 2017-5-10 19:34:19

张宏道 发表于 2017-5-10 15:05
使用的trizol，最经典的方法，不会有问题。

你好，之前搜到这篇文献，“Assessing cellular and circulating miRNA recovery: the impact of the RNA isolation method and the quantity of input material“其中结论说到：


Concerning the phenol-based method of Trizol® LS, it resulted in RNA extracts with very low purity which affected RT-qPCR efficiency, albeit acceptable results were obtained with high input material. Nevertheless, we do not recommend this method for miRNA studies owing to (1) the reproducibility issues that may arise from the poor sample purity,(2) the previously reported selective loss of small RNA molecules with low GC content30, and (3) the availabilityof other methods demonstrating better results for miRNA analysis.


不知道你对于这个问题是怎么看的:lol

张宏道 发表于 2017-5-11 09:13:58

huang_0207 发表于 2017-5-10 19:34
你好，之前搜到这篇文献，“Assessing cellular and circulating miRNA recovery: the impact of the RNA ...

我觉得这个问题需要比较全面的进行比较和分析，因为trizol结合醇沉淀的方法会有其局限性，但其他的方法也会有其自身的问题。具体问题具体分析吧，就我自身经验我使用过trizol和另外一块column based kit（名字不提了），提取的RNA跑2100结果发现，该column kit丢失掉了挺多RNA组分的。所以后来就一直采用trizol结合醇沉的方法了。我也希望有人能对这个问题有比较全面的比较。

huang_0207 发表于 2017-5-11 12:05:27

张宏道 发表于 2017-5-11 09:13
我觉得这个问题需要比较全面的进行比较和分析，因为trizol结合醇沉淀的方法会有其局限性，但其他的方法也 ...

:lol谢谢解答，对这个问题我总算有了些眉目

微微的小龙虾 发表于 2017-5-25 10:31:09

hzangs 发表于 2017-5-10 10:57
有朋友用TRIZOL LS。 跑qPCR 可以

您好，请问一下trizol 可以吗？还是只能用 trizol ls 法

doctorguotie 发表于 2017-6-30 17:11:39

使用的trizo
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