惜名
发表于 2015-7-21 08:49:04
本帖最后由 惜名 于 2015-7-21 08:54 编辑
kadak007 发表于 2015-7-20 20:56
版主,请指导下,PBS-exo处理细胞,你一般让它们共同孵育多久呢?按小时算,还是按天算? ...
这个恐怕得看你的exo通过什么途径发挥作用、以及你要检测什么。
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如果你推测exo可以通过膜表面蛋白作用,那么时间应该是很快的,只要exo和细胞接触就可以作用了。然后你如果要检测mRNA表达,数小时就可以了。如果做蛋白,那就得16-24小时。
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如果你推测exo是通过里面的miRNA作用,那么时间就得参照转染miRNA的了,例如,我看到的文献一般是在转染miRNA 36小时做检测。因为miRNA进到细胞还需要如靶序列结合、然后作用。
kadak007
发表于 2016-3-14 16:05:43
惜名 发表于 2015-7-21 08:49
这个恐怕得看你的exo通过什么途径发挥作用、以及你要检测什么。
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如果你推测exo可以通过膜 ...
惜名版主,留言中提到 “做蛋白,16-24小时”,这个经验最开始有没有文献出处呢?可否推荐下?
lucida1973
发表于 2016-7-15 03:16:47
这个帖子太需要了,谢谢给位的分享!!!!
中义
发表于 2016-9-29 13:49:23
感谢各位大神精彩讨论,学习学习!!!
ashey
发表于 2016-10-13 17:08:21
向荣y 发表于 2015-4-20 13:11
多谢惜名!!我用的间充质干细胞外体,180ML上清重悬到1.2ml的PBS中,加到种有肿瘤细胞的96孔板里,做了 ...
你好,现在准备肿瘤细胞培养上清外泌体处理细胞了,不知道你180ml上清提取的外泌体浓度大概是多少啊?做MTT实验时加入最大外泌体浓度体积是多少?
lucida1973
发表于 2016-10-31 19:37:25
惜名 发表于 2015-4-16 11:08
用外泌体干预细胞没有可参考的依据。你可以自己做个浓度梯度,在我看的有限的文献里,似乎都没有提外泌体浓 ...
马克一下
雪岭御剑
发表于 2017-2-22 15:57:24
丁倩倩 发表于 2015-4-16 20:57
我之前看的一篇文献10-50ug/mll都是可以的,200ug/ml以上会有脂毒性(我老板对这种说法一直嗤之以鼻,认为 ...
请问你说的10微克每毫升是每次换液都加一次这么多外泌体吗?
atlanticocean
发表于 2017-11-13 08:14:05
惜名 发表于 2015-7-2 10:02
我用SBI提取的exo,得率之高令人乍舌。。。
所以我给出的浓度可能不是很准确,混杂了一些细胞培养液中的 ...
多大的孔?96孔板的孔?
赤道的边际
发表于 2020-12-9 12:53:07
惜名 发表于 2015-7-8 10:54
这篇Nature immunology ,exo干预细胞基本都是用的5ug/ml;
这篇circulation 用的是exo粒子数定量。
这篇 ...
请问外泌体处理细胞时是直接加进去孵育吗?多久时间呢?需要spin down处理去孵育吗?
minterist
发表于 2021-7-29 17:03:36
丁倩倩 发表于 2015-4-16 20:57
我之前看的一篇文献10-50ug/mll都是可以的,200ug/ml以上会有脂毒性(我老板对这种说法一直嗤之以鼻,认为 ...
请问具体哪篇文章能分享一下吗?谢谢啦