范范 发表于 2017-11-14 09:07:50

外泌体无菌问题

请问大家由于超离是在别的实验室做的，虽然管子都是一次性的无菌管子，但是整个过程中还是有很多步骤不能保证无菌，那最后提取出来的外泌体做功能实验可以用0.22um滤器过滤吗，过滤会不会让外泌体损失很多啊？

小朋友玩 发表于 2017-11-14 09:57:30

离心过程中不能保持无菌,需要用0.22um滤器过滤,过滤前可以提前用培养基或者PBS润洗一下滤网,然后过滤后,再继续打一些培养基或者PBS

范范 发表于 2017-11-14 21:30:11

小朋友玩 发表于 2017-11-14 09:57
离心过程中不能保持无菌,需要用0.22um滤器过滤,过滤前可以提前用培养基或者PBS润洗一下滤网,然后过滤后,再 ...

您的意思是我用提取出来的外泌体过滤网前后都用一定量的培养基或者PBS先湿润一下滤网？这样就可以尽量减少我已经提取出来的外泌体由于过滤而造成的损失，是这样子的吗？谢谢大神！

lz93046 发表于 2017-11-17 19:07:02

在超净台中，用无菌注射器吸取溶液，安装高压过的0.22um滤头过滤至无菌离心管。

范范 发表于 2017-11-18 17:55:48

lz93046 发表于 2017-11-17 19:07
在超净台中，用无菌注射器吸取溶液，安装高压过的0.22um滤头过滤至无菌离心管。 ...

这样的操作我知道，我是担心提取出来的外泌体经过滤器之后会不会有损失？

lz93046 发表于 2017-11-20 16:32:46

范范 发表于 2017-11-18 17:55
这样的操作我知道，我是担心提取出来的外泌体经过滤器之后会不会有损失？ ...

损失是绝对的，量的问题。。只是这个方法感觉最合适。

anlinyuan 发表于 2019-1-27 16:53:50

请问您的问题解决了吗？我想问一下应该用什么滤器能让损耗降低呢？

范范 发表于 2019-2-14 21:38:07

anlinyuan 发表于 2019-1-27 16:53
请问您的问题解决了吗？我想问一下应该用什么滤器能让损耗降低呢？

不过滤，操作注意点没有问题的

xiaohuanhenxian 发表于 2019-3-7 09:42:00

范范 发表于 2019-2-14 21:38
不过滤，操作注意点没有问题的

您好，所以最好是只有最后一步使用无菌PBS在超净台里重悬吗

weixiao 发表于 2019-8-12 21:18:38

我之前都没有注意这个问题，每次超离之后直接在室内环境做的，后续就做了wb实验和提取rna的实验，会有影响吗？新手在摸索阶段，求解答
还有一点，在用试剂盒的时候，中间有几次加试剂的，都需要在超净工作台完成吗？
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