wenzhouzsl 发表于 2015-7-2 09:51:34

exo uptake实验，如何去除残余染料

各位大侠，最近要做exo 摄取实验，首先要用PKH67标记exosome，然后去除多余染料。文献报道去除残余染料，可用超速离心的方法，可我们没有超速离心机。
还有一篇文章，用的是7kDa的脱盐柱，可是脱盐柱没用过啊。
做过该实验的大侠，还有其他方法吗？

hzangs 发表于 2015-7-2 22:19:00

Izon 公司目前有一款凝胶排阻柱子   可以用来分离exosome。我感觉你可以尝试用他们家的柱子做一次纯化试一试，相当于从样品里回收exosome，也许可以达到你去除多余燃染料的目的。

wenzhouzsl 发表于 2015-7-3 16:18:24

hzangs 发表于 2015-7-2 22:19
Izon 公司目前有一款凝胶排阻柱子   可以用来分离exosome。我感觉你可以尝试用他们家的柱子做一次纯化试一 ...

好的，谢谢您的建议。

惜名 发表于 2015-7-2 10:03:46

一篇JCI用0.5%的BSA中和染色结束的混合液，这个步骤就是去除多余染料的么？

wenzhouzsl 发表于 2015-7-2 10:08:42

惜名 发表于 2015-7-2 10:03
一篇JCI用0.5%的BSA中和染色结束的混合液，这个步骤就是去除多余染料的么？

嗯，文献中说PKH-67染完是要用BSA中和，但是还说要超速离心，不知道BSA是否能彻底去除残余染料？

惜名 发表于 2015-7-2 10:19:43

wenzhouzsl 发表于 2015-7-2 10:08
嗯，文献中说PKH-67染完是要用BSA中和，但是还说要超速离心，不知道BSA是否能彻底去除残余染料？ ...

超速离心当然要的，这就是重新提取exo的过程啊。
至于是否能彻底去除，我觉得应该是可以的吧。我做过3次，都是用这个方法，出来的免疫荧光图还蛮好的。

wenzhouzsl 发表于 2015-7-2 14:05:16

惜名 发表于 2015-7-2 10:19
超速离心当然要的，这就是重新提取exo的过程啊。
至于是否能彻底去除，我觉得应该是可以的吧。我做过3次 ...

谢谢您。
我们学校这里没有超速离心机，现在只能用脱盐柱了。不知道效果如何？
超离应该还是最经典的方法。

TiTi 发表于 2015-7-4 14:01:39

要彻底去除PKH67需要蔗糖密度离心，因为PKH会自发形成胶束。
用Exo-quick来除可能也可以，但也要若干次，而且暂无文献支持:)

shenia 发表于 2015-7-9 09:28:00

我也是用Exo-Quick重新提取一次，可以加个染料组的阳性对照，看还可以看出摄取的效果的

hereissyk 发表于 2015-7-22 14:42:05

马克，感觉要用
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