微泡biomarker 发表于 2015-11-10 09:58:39

问一下大家都用什么试剂破坏exosome的膜结构啊

本人刚接触exosome，在使用了试剂盒得到了exosome后，不知道那种试剂适合破除exosome的膜。顺便问一下大家，破膜之后都用什么方法得到蛋白啊？ 希望大家多多支持，多多回答哦。

习玉峰 发表于 2015-11-10 20:55:02

50ul 的exosomes PBS悬液，再加入50ul 的RIPA裂解液（强），冰上裂解30min。

微泡biomarker 发表于 2015-11-11 16:36:47

习玉峰 发表于 2015-11-10 20:55
50ul 的exosomes PBS悬液，再加入50ul 的RIPA裂解液（强），冰上裂解30min。

非常感谢呢，能不能再问一下50 ul能得到多少的蛋白啊，还有事用什么沉淀的蛋白呢？

熊胖 发表于 2015-11-11 20:00:59

习玉峰 发表于 2015-11-10 20:55
50ul 的exosomes PBS悬液，再加入50ul 的RIPA裂解液（强），冰上裂解30min。

请问一下你RIPA加cocktail么？

习玉峰 发表于 2015-11-13 09:35:36

微泡biomarker 发表于 2015-11-11 16:36
非常感谢呢，能不能再问一下50 ul能得到多少的蛋白啊，还有事用什么沉淀的蛋白呢？ ...

取决于你从多少细胞培养上清中分离exosomes，最后用多少PBS重悬，两者比例大概是100:1，得到的exosomes蛋白接近1ug/ul。（文献上讲的有，还是多看文献吧！）

习玉峰 发表于 2015-11-13 10:17:27

熊胖 发表于 2015-11-11 20:00
请问一下你RIPA加cocktail么？

对呀，抑制蛋白降解

murong 发表于 2016-2-23 15:53:42

学习了，谢谢

meiling 发表于 2017-5-31 14:11:16

习玉峰 发表于 2015-11-13 10:17
对呀，抑制蛋白降解

请问PMSF是不是也是抑制蛋白裂解呢？

sonhakuuu 发表于 2019-1-23 09:54:46

习玉峰 发表于 2015-11-10 20:55
50ul 的exosomes PBS悬液，再加入50ul 的RIPA裂解液（强），冰上裂解30min。

请问冰上裂解30min后需要离心吗？离心转速是多少呀？离心时间呢？

shuizhu 发表于 2019-10-9 14:21:19

你好，我问下细胞上的膜蛋白是不是也会存在于外泌体的膜上呀，谢谢
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