流氓兔2841 发表于 2015-11-19 10:22:23

如何制备exosome-free FBS,并保证其无菌用以培养细胞?

最近想开展细胞实验,制备exosome-free FBS倒不是什么难事,关键是怎么保证其无菌来培养细胞,一直卡在这里,希望大神们指导!谢谢!

memorywind 发表于 2017-7-11 08:37:38

本帖最后由 memorywind 于 2017-7-11 08:43 编辑

cherylsun 发表于 2017-7-11 00:22
请问022um过滤是指无外泌体血清过夜超速离心后取上清再进行0.22um过滤,后面都无菌操作是吗?后续要做共 ...
我用Beckman的超高速離心機,管子也都是開口的。使用前離心的鐵管蓋子會噴酒精,塑膠管會滅菌,我用的塑膠管材質可以滅菌。然後我是在無菌台裡分裝FBS到管子,蓋上鋁箔拿到外面快速秤重(鋁箔不會一起秤),再拿回無菌台balance,離心時保持4度C,隔天離心完之後取上清直接在無菌台裡進行0.22um過濾,之後都是無菌操作。我這樣做已經離心過很多次FBS也收過很多次細胞的exosome,不會汙染,細胞也會長,看不出來和一般FBS養的細胞有什麼差異。所以用0.22um過濾應該不會太嚴重造成FBS營養流失之類的。PS.我養的是腫瘤細胞,FBS離心是100%的FBS,不會先配製成培養液在離心。

陆峰彬 发表于 2016-5-7 15:51:23

楼主,请问你培养怎么样?怎么保证无菌?请指教,多谢了

lenoch 发表于 2016-5-11 12:50:54

0.22过滤

divebomb 发表于 2016-6-17 09:41:06

过滤可以的,我刚试完

upboom 发表于 2016-7-7 08:48:21

0.22过滤,难道不会将BS中的营养物质过滤掉么?

cherylsun 发表于 2017-7-11 00:22:46

divebomb 发表于 2016-6-17 09:41
过滤可以的,我刚试完

请问022um过滤是指无外泌体血清过夜超速离心后取上清再进行0.22um过滤,后面都无菌操作是吗?后续要做共培养,再请教一下,分离的外泌体如何无菌,特别是在超速离心机上,我这边的转子配的管子都是开口的

divebomb 发表于 2017-7-28 13:29:55

cherylsun 发表于 2017-7-11 00:22
请问022um过滤是指无外泌体血清过夜超速离心后取上清再进行0.22um过滤,后面都无菌操作是吗?后续要做共 ...

对,后面就是无菌操作了。外泌体无菌操作很难,但是一般不会污染细胞。这个问题我也纠结过一段时间,最后一步PBS复溶的时候用无菌PBS,尽量超净台里面做,可能会好点。

divebomb 发表于 2017-7-28 13:35:14

upboom 发表于 2016-7-7 08:48
0.22过滤,难道不会将BS中的营养物质过滤掉么?

这个不至于,还用人用无血清培养基养细胞呢。

exosor 发表于 2017-7-28 19:18:36

Beckman 也有可以高压灭菌的管子,到官网或者工程师都可以联系买到
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