外泌体电镜拍出来是这样的,希望大家给点建议
第一次分离外泌体,用超速离心的方法,最后重悬到PBS中,滴了20微升重悬液到铜网上自然晾干(半小时左右),又滴了20微升磷钨酸到铜网上自然晾干(半小时左右),然后过了一个小时拿去检测拍出来的TEM是这样的黑块。。。不知道问题出在哪,希望大家能给点建议。。。我们是将沉淀下来的exosomes 用少量的PBS 重悬,大概30ul。 然后10ul上样到铜网,沉淀1min,滤纸吸掉多余液体,然后醋酸双氧铀负染1min,滤纸洗掉多余液体。然后开始准备上电镜(上机前样品应该是晾干的,准备期间就足以晾干,大概在10min左右即可) 80-120kv成像即可。 楼主上图中未见到明确的exosome;倒数第二张图中是背景色,不是exosome。描述的染色方法错误。磷钨酸负染请参照我的其他回答帖子。 hzangs 发表于 2015-11-27 20:15
我们是将沉淀下来的exosomes 用少量的PBS 重悬,大概30ul。 然后10ul上样到铜网,沉淀1min,滤纸吸掉多余液 ...
好的。。谢谢! zqy2002 发表于 2015-11-27 20:37
楼主上图中未见到明确的exosome;倒数第二张图中是背景色,不是exosome。描述的染色方法错误。磷钨酸负染请 ...
请问一下第一张和第二张里面的是不是也是背景色?没有产物?我是用了200ml上清超速离心,到最后有白色沉淀产生,用1mlPBS重悬,最后制样拍TEM,很奇怪为什么会没有东西呢? 也许第一二张片子里面白色底色是exosome也不一定。但目前不能看出来。 hzangs 发表于 2015-11-27 20:15
我们是将沉淀下来的exosomes 用少量的PBS 重悬,大概30ul。 然后10ul上样到铜网,沉淀1min,滤纸吸掉多余液 ...
请问你是用多少的培养上清沉淀下来的exosome呢?用30ul重悬。大概蛋白能达到多少ug? 怒放的生命 发表于 2015-11-30 11:05
请问你是用多少的培养上清沉淀下来的exosome呢?用30ul重悬。大概蛋白能达到多少ug? ...
100-150ml hzangs 发表于 2015-11-30 11:47
100-150ml
多谢!在论坛里收获好大:loveliness: zqy2002 发表于 2015-11-29 19:29
也许第一二张片子里面白色底色是exosome也不一定。但目前不能看出来。
这是我今天新拍的TEM,感觉有点怪。。特别是第一第二张,请问这个是exosome吗?