千夏的失火夏天 发表于 2016-2-27 20:25:02

外泌体RNA提取

想请教一下大家，提取外泌体RNA用的是什么试剂盒，提出来的浓度大概是多少，谢谢各位了~

xinyi717 发表于 2016-3-16 23:15:07

同想向各位前辈请教，顶贴~

胖子的心境 发表于 2016-3-21 10:02:27

同问啊，有没有人做过

hzangs 发表于 2016-3-21 12:20:27

trizol 或者随便用一个微量RNA提取试剂盒
我是用trizol的

woshiyywlly 发表于 2016-3-22 14:18:15

trizol和trizol LS都可以，大概100ug exosome能提出0.5-1.5 ug 的RNA（从细胞上清中提取的exosome，RNA含量和细胞种类也有关系）

旋转的尾音 发表于 2016-4-1 17:04:36

hzangs 发表于 2016-3-21 12:20
trizol 或者随便用一个微量RNA提取试剂盒
我是用trizol的

你好，请问50微升的PBS里，一般用多少trizol？

旋转的尾音 发表于 2016-4-1 17:05:19

woshiyywlly 发表于 2016-3-22 14:18
trizol和trizol LS都可以，大概100ug exosome能提出0.5-1.5 ug 的RNA（从细胞上清中提取的exosome，RNA含量 ...

你好，请问50微升的PBS里，一般用多少trizol？

hzangs 发表于 2016-4-1 19:33:34

旋转的尾音 发表于 2016-4-1 17:05
你好，请问50微升的PBS里，一般用多少trizol？

1mltrizol就可以。 但是体系含水量高，你需要在加入异丙醇后再加入10%体积的3M醋酸钠去调一下体系盐离子强度 来促进RNA沉淀

旋转的尾音 发表于 2016-4-5 10:45:23

hzangs 发表于 2016-4-1 19:33
1mltrizol就可以。 但是体系含水量高，你需要在加入异丙醇后再加入10%体积的3M醋酸钠去调一下体系盐离 ...

感谢回复，请问是否有文献给我学习一下。之前提了一次，一个样本含量很低，另一个纯度不高，所以还在摸索阶段。

hzangs 发表于 2016-4-5 10:50:37

旋转的尾音 发表于 2016-4-5 10:45
感谢回复，请问是否有文献给我学习一下。之前提了一次，一个样本含量很低，另一个纯度不高，所以还在摸索 ...

这方面的文献没读过。都是以前抽RNA的经验。qiagen抽提膜泡内RNA的kit我一个朋友使用过了，出来的量和我trizol抽提产量基本一样。 而且260/280的值也基本都是一样，只有1.4-1.7那样。   确实产量低，也是因为这个原因，所以260/280对这个RNA质量没有什么评价意义
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