胖子的心境 发表于 2016-4-10 13:48:40

乳汁中分离外泌体，抽提RNA，遇到问题，求大神看看

最近看了许多关于外泌体的一些相关知识，在开展乳汁外泌体分离的预实验，但是遇到了尴尬。
ps: 因为我们学校没有电镜，所以我打算的是先从分离出来的外泌体RNA抽提开始，间接判断是否得到exosome，确定方法，再进行电镜，nanosight检测。
我的分离步骤是：
1 50ml样品3000g 30min，剔除细胞，脂肪球等；
2 13000g 30min，细胞碎片，残余的细胞等，过0.45um过滤器；
3 100,000g 60min，剔除大的囊泡，过0.22um过滤器（超离是5ml的管子，一次只能4个；最后将4个pool抽提RNA）；
4 135,000g 90min，弃上清液，50ul PBS重悬。
5 用常规Trizol（艾德来）抽提总RNA（RNA电泳什么都看不到:'(）

胖子的心境 发表于 2016-4-10 13:50:48

最后一步离心后，下面还有一沉透明的沉淀。加入trizol后变成白色。也搞不清楚这个东西是什么！用它抽提RNA也没有结果。
求各位大神看看，指导一下！

zhaojia 发表于 2016-4-10 18:35:33

还没做过

Johnny 发表于 2016-4-10 22:26:46

胖子的心境 发表于 2016-4-10 13:50
最后一步离心后，下面还有一沉透明的沉淀。加入trizol后变成白色。也搞不清楚这个东西是什么！用它抽提RNA ...

你看看trizol有没有把管底腐蚀

旋转的尾音 发表于 2016-5-15 23:10:01

Johnny 发表于 2016-4-10 22:26
你看看trizol有没有把管底腐蚀

之前碰到的加Trizol进入离心管的，确实会腐蚀
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