huan1989111007 发表于 2014-12-30 16:07:57

求助，从exosome提出RNA后的qPCR.

求助各位，由于标本有限，从exosome提出的RNA只有10ng左右，想问下你们做逆转录时用的是哪一家的试剂盒？谢谢各位兄弟姐妹！谢谢！

wanghx_85 发表于 2015-6-12 08:55:21

这是我昨天收到的技术支持发给我的文件，关于SBI研究外泌体miR的一些相关设计，感兴趣的可以看一下，我还没来得及看;P，有兴趣大家一起交流下~

muyujun123 发表于 2015-1-14 17:05:45

惜名 发表于 2015-1-9 09:22
你有相关文献么？可以贴出来分享一下~我对这方面内容目前了解的不多，就以U6作为内参的，是可以跑出来的 ...

因为exosome中u6的含量不太稳定，所以一般人为的加入外参来定量。我也不是很清楚，正在摸索。我觉得可能是加入标准品进行绝对定量吧

惜名 发表于 2015-1-2 14:44:19

你是做miRNA吧？我用天根的逆转录kit，跑出来循环数较高，25-30个吧。扩增曲线蛮好的~据另一个战友讲，QIANGEN的更好一点，进口的，贵。。。

huan1989111007 发表于 2015-1-2 19:07:43

惜名 发表于 2015-1-2 14:44
你是做miRNA吧？我用天根的逆转录kit，跑出来循环数较高，25-30个吧。扩增曲线蛮好的~据另一个战友讲，QIAN ...

thanks. 确实是miRNA. 看过相应文献有用Qiangen的，还有Takara。第一个如您所说，贵，第二个公司逆转录的停产了。不过谢谢分享，谢谢

huan1989111007 发表于 2015-1-2 19:08:56

惜名 发表于 2015-1-2 14:44
你是做miRNA吧？我用天根的逆转录kit，跑出来循环数较高，25-30个吧。扩增曲线蛮好的~据另一个战友讲，QIAN ...

thanks. 确实是miRNA. 看过相应文献有用Qiangen的，还有Takara。第一个如您所说，贵，第二个公司逆转录的停产了。不过谢谢分享，谢谢

muyujun123 发表于 2015-1-5 19:47:50

惜名 发表于 2015-1-2 14:44
你是做miRNA吧？我用天根的逆转录kit，跑出来循环数较高，25-30个吧。扩增曲线蛮好的~据另一个战友讲，QIAN ...

能不能交流一下？你做exosome的mirna定量pcr所用的外参是什么？有用cel-mir-39的，这个是要在提取rna的时候另外加进去吗还是？

惜名 发表于 2015-1-7 10:20:01

muyujun123 发表于 2015-1-5 19:47
能不能交流一下？你做exosome的mirna定量pcr所用的外参是什么？有用cel-mir-39的，这个是要在提取rna的时 ...

外参？不知道还需要这个东西啊。。。我只用了内参

muyujun123 发表于 2015-1-8 20:03:27

惜名 发表于 2015-1-7 10:20
外参？不知道还需要这个东西啊。。。我只用了内参

内参？用的u6吗？但是我看文献里说，exosome里面的mirna是要用外参的啊，exosome里有u6吗？

惜名 发表于 2015-1-9 09:22:37

muyujun123 发表于 2015-1-8 20:03
内参？用的u6吗？但是我看文献里说，exosome里面的mirna是要用外参的啊，exosome里有u6吗？ ...

你有相关文献么？可以贴出来分享一下~我对这方面内容目前了解的不多，就以U6作为内参的，是可以跑出来的。设置外参的目的是什么呢？

木瓜31 发表于 2015-1-10 16:22:12

muyujun123 发表于 2015-1-8 20:03
内参？用的u6吗？但是我看文献里说，exosome里面的mirna是要用外参的啊，exosome里有u6吗？ ...

我也想了解这方面的知识，可以分享下相关文献吗？谢谢哦
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