exosun 发表于 2016-11-15 13:05:59

外泌体BCA测出蛋白浓度太低,请教大家

我用2016年的protocol超离的外泌体,看不到沉淀,重悬在200ulPBS中-80保存,4天后不加裂解液,直接BCA测定蛋白浓度,想跑标志蛋白的western,蛋白浓度很低,只有0.396ug/ul,请问大家可能是哪里出了问题?

exosun 发表于 2016-11-16 00:16:24

baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-15 23:21
0.4ug/ul, 浓度还可以,一般上样量5-10ug左右就可以检测到绝大部分标志蛋白了(CD63,Tsg101,Flotilin 1 ...

谢谢,明天就准备干起来了!

baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-15 23:21:40

0.4ug/ul, 浓度还可以,一般上样量5-10ug左右就可以检测到绝大部分标志蛋白了(CD63,Tsg101,Flotilin 1)。

张外泌体 发表于 2016-12-22 08:43:56

baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-15 23:21
0.4ug/ul, 浓度还可以,一般上样量5-10ug左右就可以检测到绝大部分标志蛋白了(CD63,Tsg101,Flotilin 1 ...

你好,我测出来的浓度已经达到了0.5ug/ul,用的是国产抗体,结果怎么都做不出来,想问下是抗体的原因吗?电镜做了能看到外泌体的结构

baishixiaoyaozi 发表于 2016-12-23 01:56:21

张外泌体 发表于 2016-12-22 08:43
你好,我测出来的浓度已经达到了0.5ug/ul,用的是国产抗体,结果怎么都做不出来,想问下是抗体的原因吗? ...

CD63:Santa Cruz
TSG101 and Flotillin 1: BD Bioscience
这些是我用的抗体,效果还不错。
你试试actin或GAPDH抗体,外泌体中可以检测到这两个蛋白。或者转膜后用立春红染色看看蛋白含量。

张外泌体 发表于 2016-12-23 09:01:20

baishixiaoyaozi 发表于 2016-12-23 01:56
CD63:Santa Cruz
TSG101 and Flotillin 1: BD Bioscience
这些是我用的抗体,效果还不错。


我试一下,太谢谢你了

今日事今日毕 发表于 2017-1-3 11:12:09

楼主,新手问一下,你BCA测浓度,是用的试剂盒吗

exosun 发表于 2017-2-12 19:08:29

今日事今日毕 发表于 2017-1-3 11:12
楼主,新手问一下,你BCA测浓度,是用的试剂盒吗

都是实验室可以直接领的试剂,没有试剂盒。

JKF 发表于 2018-1-23 21:23:48

我也没有看到沉淀,正在测浓度

JKF 发表于 2018-1-23 21:25:16

张外泌体 发表于 2016-12-22 08:43
你好,我测出来的浓度已经达到了0.5ug/ul,用的是国产抗体,结果怎么都做不出来,想问下是抗体的原因吗? ...

测BCA 需要先裂解吗
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