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标题: 关于PEG提取外泌体 [打印本页]

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作者: 小孔加油    时间: 2016-8-3 13:34
标题: 关于PEG提取外泌体
请问各位，PEG提取外泌体需要现用现配吗？配制好的PEG溶液怎么保存？

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作者: 林剑邦    时间: 2016-8-3 19:09
楼主用PEG提取效果如何呀？杂蛋白多吗？

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作者: seallin    时间: 2016-8-3 22:14
不需要现配现用，配完4000 g离心，0.22 um过滤后保存常温放置即可

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作者: 小孔加油    时间: 2016-8-10 10:54

seallin 发表于 2016-8-3 22:14
不需要现配现用，配完4000 g离心，0.22 um过滤后保存常温放置即可

请问为什么要用4000g离心？不太明白。过滤是为了无菌吗？

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作者: seallin    时间: 2016-8-10 12:51

小孔加油 发表于 2016-8-10 10:54
请问为什么要用4000g离心？不太明白。过滤是为了无菌吗？

因为后续为了得到pellet要用低速离心，所以为了使得pellet里不含有PEG固体中存在的杂质，所以最好先离心，以提高pellet的纯度

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作者: 小孔加油    时间: 2016-8-10 17:10

seallin 发表于 2016-8-10 12:51
因为后续为了得到pellet要用低速离心，所以为了使得pellet里不含有PEG固体中存在的杂质，所以最好先离心 ...

太感谢了！请问您有没有用PEG提取过的外泌体培养细胞？残留的PEG对细胞有损伤吗？

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作者: 小孔加油    时间: 2016-8-10 17:32

林剑邦 发表于 2016-8-3 19:09
楼主用PEG提取效果如何呀？杂蛋白多吗？

不好意思，我才刚开始，还没做到western那步

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作者: 小孔加油    时间: 2016-8-11 08:08

seallin 发表于 2016-8-3 22:14
不需要现配现用，配完4000 g离心，0.22 um过滤后保存常温放置即可

请问4000g离心多长时间呢

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作者: seallin    时间: 2016-8-14 21:48

小孔加油 发表于 2016-8-10 17:10
太感谢了！请问您有没有用PEG提取过的外泌体培养细胞？残留的PEG对细胞有损伤吗？ ...

这我没试过，我估计会有点影响的. 最好还是用超离的外泌体培养细胞

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作者: 原代中国好男人    时间: 2016-8-15 21:13

林剑邦 发表于 2016-8-3 19:09
楼主用PEG提取效果如何呀？杂蛋白多吗？

这个方法杂蛋白应该是比较多吧，感觉还是梯度密度超速离心的方法比较好，但是感觉这技术好难！

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作者: 原代中国好男人    时间: 2016-8-15 21:15
这个方式不太好

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