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标题: 一种无血清培养基的分享 [打印本页]
作者: 惜名    时间: 2015-3-8 14:41
标题: 一种无血清培养基的分享
我们都知道，血清中含有极为丰富的exo，因此有严谨的文献会在使用血清前进行梯度离心法以去除exo。
SBI也有去除exo的血清可以购买，但是上面两种方法要么麻烦，要么太贵。

前段时间，我实验室得知一种新的培养基，LONZA的X-VIVO，这是瑞士一家制药公司。
我们用来养DC，发现细胞状态蛮好的，肉眼观察不劣于IMDM+FBS（DC的传统培养基）。
当然，下次我们打算检测一下DC的纯度和成熟度，以更好的评价该培养基对细胞是否有额外作用。

经提取exo测浓度，发现用IMDM+FBS培养时，4ml上清可得100-200ug exosomal protein（ECA法）
而换用X-VIVO后，6ml上清只能得到20ug exosomal protein（ECA法），可见FBS中含有丰富的exo


这个培养基貌似以培养肿瘤细胞、免疫细胞及部分干细胞为主，感兴趣的童鞋可以看看是否能用上
价格方面倒也便宜，1000ml才700块左右，真是一举两得。
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声明： 笔者与LONZA无任何利益关系。



作者: 惜名    时间: 2015-3-8 15:13
Johnny 发表于 2015-3-8 15:06
LONZA的X-VIVO  是一种无血清培养体系？

对的  据销售人员称   这个培养基用的还是蛮多的  我百度了下   的确有这个东西   里面添加了其他成分  不需要血清   细胞就可以很好的生长~
作者: 惜名    时间: 2015-3-8 15:20
Johnny 发表于 2015-3-8 15:14
好哒，有网站链接什么的吗

http://www.lonza.com/products-se ... pecialty-media.aspx 这是官网
销售人员的联系方式我明天再贴上了，名片在师兄那里~
作者: langlang007jj    时间: 2015-3-8 20:15
去除了FBS中exosome的干扰，还不贵，果然是一举两得，期待楼主检测DC的纯度和成熟度的结果。谢谢分享~
作者: luckkit    时间: 2015-3-10 13:35
System Biosciences推出的Exo-free FBS, 250ml, 700多刀，刚刚用上
作者: 惜名    时间: 2015-3-10 16:23
luckkit 发表于 2015-3-10 13:35
System Biosciences推出的Exo-free FBS, 250ml, 700多刀，刚刚用上

这个价格在美帝其实还可以接受啦  不知漂洋过海到天朝会变成多少钱呢
作者: dancer0711    时间: 2015-3-10 22:20
惜名 发表于 2015-3-8 15:20
http://www.lonza.com/products-services/bio-research/cell-culture-products/specialty-media.aspx 这 ...

求销售人员的联系方式，谢谢
作者: luckkit    时间: 2015-3-11 12:22
对，是在米帝，国内不让卖？
作者: 惜名    时间: 2015-3-11 15:10
dancer0711 发表于 2015-3-10 22:20
求销售人员的联系方式，谢谢

达科为 杨扬 136 1195 4607
作者: dancer0711    时间: 2015-3-11 18:53
惜名 发表于 2015-3-11 15:10
达科为 杨扬 136 1195 4607

谢谢啦
作者: 苏静    时间: 2015-3-11 22:34
大家可以用无血清的培养基来养  细胞维持两天 状态还是不错的
作者: hzangs    时间: 2015-3-19 18:51
我用的FBS 都是自己处理去除exosome的  感觉也没有太费事    一般我一次处理500ml 放着慢慢用
作者: luckkit    时间: 2015-4-1 13:22
苏静 发表于 2015-3-11 08:34
大家可以用无血清的培养基来养  细胞维持两天 状态还是不错的

试过血清饥饿24h,前面PBS洗3次，同样超速离心，产量极低，约为Exo-free FBS条件下的1/10.
作者: 苏静    时间: 2015-4-14 18:28
luckkit 发表于 2015-4-1 13:22
试过血清饥饿24h,前面PBS洗3次，同样超速离心，产量极低，约为Exo-free FBS条件下的1/10. ...

一般 多少ml的提多少g外泌体 给个概念吧
作者: yy8651    时间: 2015-4-14 20:36
luckkit 发表于 2015-4-1 13:22
试过血清饥饿24h,前面PBS洗3次，同样超速离心，产量极低，约为Exo-free FBS条件下的1/10. ...

有没有再次验证呢？去血清后有这么大变化呀？
作者: niceman1987    时间: 2015-5-19 16:31
请问大家收集的细胞上清在超离之前是如何保存的？4°C，-20°C，还是-80°C，谢谢。
作者: bobo    时间: 2015-5-20 15:04
hzangs 发表于 2015-3-19 18:51
我用的FBS 都是自己处理去除exosome的  感觉也没有太费事    一般我一次处理500ml 放着慢慢用 ...

离心时候，离心管多少毫升呢，是怎么分装的呢，我现在也想用那个超速离心机离一下，就是这个怎么分装，在纠结中
作者: wanghx_85    时间: 2015-5-26 16:04
请问楼主，用这个无血清培养基提取外泌体进行的后续实验怎么样？如果可以我也准备入手，谢谢！
作者: bobo    时间: 2015-5-26 18:39
hzangs 发表于 2015-3-19 18:51
我用的FBS 都是自己处理去除exosome的  感觉也没有太费事    一般我一次处理500ml 放着慢慢用 ...

那离心后，你是怎么分装的呢，怎么保存的呢，谢谢
作者: bobo    时间: 2015-5-26 18:50
niceman1987 发表于 2015-5-19 16:31
请问大家收集的细胞上清在超离之前是如何保存的？4°C，-20°C，还是-80°C，谢谢。 ...

你现在知道了吗，我也有这种问题，要不然就要一次养好多瓶细胞
作者: niceman1987    时间: 2015-5-26 19:27
我养的肿瘤细胞，已经定了LONZA培基，看看细胞状态如何，再跟大家分享
作者: 3090103710    时间: 2015-5-28 13:04
hzangs 发表于 2015-3-19 18:51
我用的FBS 都是自己处理去除exosome的  感觉也没有太费事    一般我一次处理500ml 放着慢慢用 ...

请问自己怎么去除FBS的exosome？我看文献里都是用含有20%血清的培养基超速离心以后再稀释成10%血清的培养基，这个一次也离心不出多少的exosome-free 培养基
作者: feifa1314    时间: 2015-6-3 16:37
Johnny 发表于 2015-3-8 15:06
LONZA的X-VIVO  是一种无血清培养体系？

是的，可以支持人和小鼠的多种免疫细胞培养。像常见的DC、CIK、NK等都可以。
作者: wanghx_85    时间: 2015-6-9 10:47
请问有人用楼主说的这个无血清培养基养肿瘤细胞的么？效果怎么样？对细胞状态和EXO的分泌有影响不？
作者: wanghx_85    时间: 2015-6-9 10:49
请问楼主用这个培养基效果怎样？对细胞和外泌体有影响没？
作者: 流氓兔2841    时间: 2016-1-19 18:36
hzangs 发表于 2015-3-19 18:51
我用的FBS 都是自己处理去除exosome的  感觉也没有太费事    一般我一次处理500ml 放着慢慢用 ...

超离过夜，再0.22μm过滤器过滤吗？
作者: 10302120shao    时间: 2016-2-20 12:57
惜名 发表于 2015-3-8 15:20
http://www.lonza.com/products-services/bio-research/cell-culture-products/specialty-media.aspx 这 ...

惜名大人，你有这个销售的联系方式吗？能否分享下？thank u
作者: 10302120shao    时间: 2016-2-20 13:11
惜名 发表于 2015-3-8 15:20
http://www.lonza.com/products-services/bio-research/cell-culture-products/specialty-media.aspx 这 ...

我想问一下正常自己配置的培养基不加血清是不是也可以达到效果？细胞成活率高吗？
作者: 惜名    时间: 2016-2-21 08:42
10302120shao 发表于 2016-2-20 13:11
我想问一下正常自己配置的培养基不加血清是不是也可以达到效果？细胞成活率高吗？ ...

达科为公司 杨扬  136 1195 4607.
自己配培养基不加血清，不就是“无血清培养基”么。这个长期养细胞肯定不行的，但是一些肿瘤细胞可以在最后48小时换这种培养基，然后手机上清中的exosome。
作者: 10302120shao    时间: 2016-2-21 09:56
谢谢惜名分享联系方式！还有个问题什么是“在最后48小时换这种培养基”？就是用完这种培养基细胞就不能在用了？那每次要提取细胞分泌的外泌体都要牺牲一批细胞？能不是很浪费细胞吗？你们是这样处理的？
作者: 惜名    时间: 2016-2-21 14:24
10302120shao 发表于 2016-2-21 09:56
谢谢惜名分享联系方式！还有个问题什么是“在最后48小时换这种培养基”？就是用完这种培养基细胞就不能在用 ...

。。。
你多看看文献吧。。。
作者: 10302120shao    时间: 2016-2-21 14:59
惜名 发表于 2016-2-21 14:24
。。。
你多看看文献吧。。。

额！
可能是我看文献还不够多，不够认真，谢谢你的解答，我再找找相关的资料吧。
作者: 曼珠沙华002    时间: 2016-2-24 11:05
我们现在用的Gibco的LHC-8培养基也不含血清，就是小贵，培养正常细胞用的。癌细胞还没有试过。
作者: 一笑而过    时间: 2016-5-4 15:31
惜名 发表于 2015-3-8 15:20
http://www.lonza.com/products-services/bio-research/cell-culture-products/specialty-media.aspx 这 ...

有销售人员的联系方式吗，谢谢
作者: 陆峰彬    时间: 2016-6-1 20:24
版主，你说X-VIVO可以培养部分干细胞，能说的详细点？有没有相关信息？我联系代理，这个适用于免疫细胞，没有用过干细胞，而且你说的干细胞是小鼠？谢谢！
作者: 惜名    时间: 2016-6-3 08:37
陆峰彬 发表于 2016-6-1 20:24
版主，你说X-VIVO可以培养部分干细胞，能说的详细点？有没有相关信息？我联系代理，这个适用于免疫细胞，没 ...

我记得应该是在官网查到的  你去LONZA的官网看看呢~
作者: comfortable    时间: 2016-6-28 11:28
宝柏 发表于 2016-5-12 18:22
其实用血清替代品也可以
StemSure Serum Replacement (SSR 197-16775)

请问我做间充质干细胞提取外泌体那是可以用你这个培养基吧  你了解有人这么做过吗
作者: 菡姝    时间: 2016-6-28 20:33
你好，版主，我想问一下用这种培养基的话，普通细胞系还可以增殖吗？
作者: 2420131939@qq.c    时间: 2016-6-28 23:39
之前看过一篇文献，说可以用1%BSA的培养基代替exosome depleted FBS~
作者: comfortable    时间: 2016-6-30 08:07
有文献报道过这种培养基吗  没报道过到时候发文章是个问题
作者: 惜名    时间: 2016-7-2 11:05
comfortable 发表于 2016-6-30 08:07
有文献报道过这种培养基吗  没报道过到时候发文章是个问题

有的
作者: 小孔加油    时间: 2016-11-7 22:00
请问楼主这种培养基能培养肿瘤细胞系吗
作者: josephinebyzy    时间: 2017-1-9 17:40
楼主，我想问下，无血清培养基既然可以让细胞在无血清的环境下生长，必然加了许多因子，那么测得的上清外泌体蛋白浓度，可以确定排除了杂蛋白及因子的干扰吗？我们曾经也使用过三有利的无血清培养基，细胞生长很快，测得的细胞上清外泌体蛋白浓度也是很高，但是总觉得这个方法虽然省事，但是不够严谨啊
作者: happyzydl    时间: 2017-6-27 10:11
comfortable 发表于 2016-6-28 11:28
请问我做间充质干细胞提取外泌体那是可以用你这个培养基吧  你了解有人这么做过吗  ...

你好，你最后用什么培养基提取的的间充质外泌体？
作者: happyzydl    时间: 2017-6-27 10:12
comfortable 发表于 2016-6-28 11:28
请问我做间充质干细胞提取外泌体那是可以用你这个培养基吧  你了解有人这么做过吗  ...

你好，你最后用什么培养基提取的的间充质外泌体？
作者: 滴哩嘟噜1217    时间: 2018-5-7 22:00
感觉这个帖子好像沉没了，，特别想之后师兄后续的验证结果，以及现在这个培养基是否有人在使用？
作者: 芝麻配海带    时间: 2018-5-8 08:34
这种血清有发表文献用过的吗
作者: anlinyuan    时间: 2018-12-8 22:15
我问了一下销售人员，这个培养基不适合养肿瘤细胞呢




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