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标题: 生无可恋... [打印本页]
作者: 今日事今日毕    时间: 2016-10-8 10:28
标题: 生无可恋...
有木有大神做的是用生理盐水冲洗的体液来提取外泌体的，例如输卵管？为什么我提不出来，大神出来救救我吧！！！
作者: 土豆    时间: 2016-10-8 13:01
作者: woshiyywlly    时间: 2016-10-8 15:13
生理盐水冲洗的体液？看着这个描述就感觉浓度一定会很低，用多少体积来提的呀？
作者: 今日事今日毕    时间: 2016-10-9 09:16
woshiyywlly 发表于 2016-10-8 15:13
生理盐水冲洗的体液？看着这个描述就感觉浓度一定会很低，用多少体积来提的呀？ ...

5ml的生理盐水
作者: 今日事今日毕    时间: 2016-10-9 09:18
woshiyywlly 发表于 2016-10-8 15:13
生理盐水冲洗的体液？看着这个描述就感觉浓度一定会很低，用多少体积来提的呀？ ...

我也是感觉浓度很低，但是感觉理论上，输卵管上那么多细胞，每个细胞都分泌，应该会比较多
作者: 今日事今日毕    时间: 2016-10-9 09:20
土豆 发表于 2016-10-8 13:01

同道中人？
作者: woshiyywlly    时间: 2016-10-9 09:55
不是，但血清、血浆、精浆、培液我都提过，感觉培液和你的可能差不多，但5ml24h的培液一般来说都提不了多少外泌体的，更何况你的是生理盐水冲洗液了，加大量吧
作者: 今日事今日毕    时间: 2016-10-9 10:05
woshiyywlly 发表于 2016-10-9 09:55
不是，但血清、血浆、精浆、培液我都提过，感觉培液和你的可能差不多，但5ml24h的培液一般来说都提不了多少 ...

最近我在试着多冲几次，请问你是用的什么方法提的，超离还是盒子？
作者: woshiyywlly    时间: 2016-10-9 10:07
今日事今日毕 发表于 2016-10-9 10:05
最近我在试着多冲几次，请问你是用的什么方法提的，超离还是盒子？

都用过，比较推荐超离，杂质比试剂盒的要少很多，而且很适合大批量提取
作者: 今日事今日毕    时间: 2016-10-9 10:08
woshiyywlly 发表于 2016-10-9 09:55
不是，但血清、血浆、精浆、培液我都提过，感觉培液和你的可能差不多，但5ml24h的培液一般来说都提不了多少 ...

我超离之后还是有沉淀的，但是电镜下看不到，染色也染不出来....已疯.....
作者: 今日事今日毕    时间: 2016-10-9 10:14
woshiyywlly 发表于 2016-10-9 10:07
都用过，比较推荐超离，杂质比试剂盒的要少很多，而且很适合大批量提取 ...

大神，你提精浆是300g 2000g 10000g之后是两个100000g 70min吗？具体转速 时间能透露一下吗？不胜感激！
作者: woshiyywlly    时间: 2016-10-9 10:16
今日事今日毕 发表于 2016-10-9 10:08
我超离之后还是有沉淀的，但是电镜下看不到，染色也染不出来....已疯..... ...

同情你，超离完有再洗一遍吗？
作者: 今日事今日毕    时间: 2016-10-9 10:19
woshiyywlly 发表于 2016-10-9 10:16
同情你，超离完有再洗一遍吗？

再洗一遍？具体指的是哪一步，用pbs把沉淀洗一下之后再离心吗？
作者: woshiyywlly    时间: 2016-10-9 10:19
今日事今日毕 发表于 2016-10-9 10:14
大神，你提精浆是300g 2000g 10000g之后是两个100000g 70min吗？具体转速 时间能透露一下吗？不胜感激！{ ...

前面是一样的，后面是110000g 70min
作者: woshiyywlly    时间: 2016-10-9 10:20
今日事今日毕 发表于 2016-10-9 10:14
大神，你提精浆是300g 2000g 10000g之后是两个100000g 70min吗？具体转速 时间能透露一下吗？不胜感激！{ ...

在70min离心前最好用0.22um的滤器过滤一下
作者: 今日事今日毕    时间: 2016-10-9 10:23
woshiyywlly 发表于 2016-10-9 10:20
在70min离心前最好用0.22um的滤器过滤一下

没过滤过...我在文献上看到这一步的目的是为了除菌，有的文献上没有这一步，就没过滤过，请问这一步的作用还有什么呢？
作者: woshiyywlly    时间: 2016-10-9 11:16
今日事今日毕 发表于 2016-10-9 10:23
没过滤过...我在文献上看到这一步的目的是为了除菌，有的文献上没有这一步，就没过滤过，请问这一 ...

就是第一次110000g 70min后用PBS重悬。过滤也是为了去除杂质，可以尽量去除直径大的囊泡和其他一些物质
作者: 今日事今日毕    时间: 2016-10-10 09:02
woshiyywlly 发表于 2016-10-9 11:16
就是第一次110000g 70min后用PBS重悬。过滤也是为了去除杂质，可以尽量去除直径大的囊泡和其他一些物质 ...

好的，明白了，我试试，谢谢大神
作者: 五仁    时间: 2016-10-10 11:28
woshiyywlly 发表于 2016-10-9 10:20
在70min离心前最好用0.22um的滤器过滤一下

最后用PBS重悬也是一个问题。文献上说用20微升到50微升的PBS重悬，但这么少的液体加入进去，实在是大海捞针，怎么重悬，最后吸出的液体甚至超过了100微升，因为原本管壁上就有剩余的液体。
作者: 五仁    时间: 2016-10-10 11:29
今日事今日毕 发表于 2016-10-10 09:02
好的，明白了，我试试，谢谢大神

楼主，使用超速离心，最后的pellet能看能到吗？我的完全是看不到的
作者: woshiyywlly    时间: 2016-10-11 10:11
五仁 发表于 2016-10-10 11:28
最后用PBS重悬也是一个问题。文献上说用20微升到50微升的PBS重悬，但这么少的液体加入进去，实在是大海捞 ...

我一般也不会用这么少的PBS，太少了吹打沉淀非常不便
作者: 今日事今日毕    时间: 2016-10-11 10:34
五仁 发表于 2016-10-10 11:29
楼主，使用超速离心，最后的pellet能看能到吗？我的完全是看不到的

我可以看到，你离得是什么液体
作者: 五仁    时间: 2017-1-11 11:06
细胞上清液，有一次明显有沉淀，就是比较少



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