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标题: 超速离心法分离血清 [打印本页]
作者: 我是小白    时间: 2016-11-7 22:25
标题: 超速离心法分离血清
请问大家用超速离心法分离血清外泌体时，血清至少需要多少呢，
作者: 土豆    时间: 2016-11-8 11:38
500ul到1ml足够
作者: july    时间: 2016-11-22 21:24
土豆 发表于 2016-11-8 11:38
500ul到1ml足够

请问500ul到1ml能提到多少呢？离心法吗？
作者: baishixiaoyaozi    时间: 2016-11-23 07:10
july 发表于 2016-11-22 21:24
请问500ul到1ml能提到多少呢？离心法吗？

根据我们实验室的结果，人血清EV含量大约为10的11－12次方／毫升，超离后（100000xg，2小时）大概还有40％左右留在上清里。
作者: ashey    时间: 2016-11-23 08:31
baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-23 07:10
根据我们实验室的结果，人血清EV含量大约为10的11－12次方／毫升，超离后（100000xg，2小时）大概还有40 ...

超离后这么多留在上清里？
作者: baishixiaoyaozi    时间: 2016-11-23 09:48
ashey 发表于 2016-11-23 08:31
超离后这么多留在上清里？

是的，下次实验打算多离心一下，或者用更大的离心力150000xg。
作者: 土豆    时间: 2016-11-23 17:31
july 发表于 2016-11-22 21:24
请问500ul到1ml能提到多少呢？离心法吗？

超离下来的外泌体沉淀肉眼可见，具体多少量的话不好说
作者: ashey    时间: 2016-11-23 19:51
baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-23 09:48
是的，下次实验打算多离心一下，或者用更大的离心力150000xg。

期待楼主分享下一步的经验
作者: baishixiaoyaozi    时间: 2016-11-24 04:39
ashey 发表于 2016-11-23 19:51
期待楼主分享下一步的经验

分享是一定的，不过我不是楼主
作者: july    时间: 2016-11-24 12:26
baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-23 07:10
根据我们实验室的结果，人血清EV含量大约为10的11－12次方／毫升，超离后（100000xg，2小时）大概还有40 ...

怎么证明还留下了40%呢？
作者: 我是小白    时间: 2016-11-24 17:44
baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-23 07:10
根据我们实验室的结果，人血清EV含量大约为10的11－12次方／毫升，超离后（100000xg，2小时）大概还有40 ...

请问有提取血清的超速离心法的protocol吗？我自己也找了好多步骤，不知道用哪一个？
作者: baishixiaoyaozi    时间: 2016-11-24 22:42
july 发表于 2016-11-24 12:26
怎么证明还留下了40%呢？

我们用NTA检测不同组分中exosome含量
作者: baishixiaoyaozi    时间: 2016-11-24 22:45
我是小白 发表于 2016-11-24 17:44
请问有提取血清的超速离心法的protocol吗？我自己也找了好多步骤，不知道用哪一个？ ...

我们实验室用两步离心，10000xg，30分钟，去除micro vesicles。100000-150000xg，2小时。
作者: yanhen521    时间: 2017-4-20 10:56
baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-24 22:45
我们实验室用两步离心，10000xg，30分钟，去除micro vesicles。100000-150000xg，2小时。 ...

请问超离500ul血浆样本，配平时加多少PBS定容？因为血浆比较稠厚，需要充分的稀释。
作者: baishixiaoyaozi    时间: 2017-4-20 21:58
yanhen521 发表于 2017-4-20 10:56
请问超离500ul血浆样本，配平时加多少PBS定容？因为血浆比较稠厚，需要充分的稀释。 ...

我们实验室一般1：1稀释。我们用的超速离心机比较小，300微升/离心管。
作者: 八戒在五湖    时间: 2017-4-23 10:11
你好，我想问一下你的血浆是加了抗凝处理的还是没加抗凝的啊，没加的可以提么
作者: lyy2410    时间: 2017-9-14 13:38
请问离下来的沉淀长什么样，是在试管底部还是壁上？什么颜色?谢谢
作者: jrr    时间: 2017-12-6 19:22
baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-24 22:45
我们实验室用两步离心，10000xg，30分钟，去除micro vesicles。100000-150000xg，2小时。 ...

请问纯度如何，要不要再超滤
作者: baishixiaoyaozi    时间: 2017-12-6 20:59
jrr 发表于 2017-12-6 19:22
请问纯度如何，要不要再超滤

说实话，纯度不是太好。我跑胶，做过考染，还是有很多血清蛋白（50-70 kDa之间，以及100kDa以上）。
我没有试过超滤。
作者: ronaldchen    时间: 2018-1-12 15:02
baishixiaoyaozi 发表于 2017-12-6 20:59
说实话，纯度不是太好。我跑胶，做过考染，还是有很多血清蛋白（50-70 kDa之间，以及100kDa以上）。
我没 ...

你做过western么，谢谢
作者: baishixiaoyaozi    时间: 2018-1-13 00:05
ronaldchen 发表于 2018-1-12 15:02
你做过western么，谢谢

做过CD81。
最近想用albumin的抗体检测一下血清蛋白污染。
作者: ronaldchen    时间: 2018-1-15 14:15
baishixiaoyaozi 发表于 2018-1-13 00:05
做过CD81。
最近想用albumin的抗体检测一下血清蛋白污染。

你好，你是吸的还是倒的啊，我是1ml稀释到12ml超离10g 2小时，吸到剩一点，最后跑WB做不出来，不知道是不是吸掉了。
作者: ronaldchen    时间: 2018-1-15 14:17
baishixiaoyaozi 发表于 2018-1-13 00:05
做过CD81。
最近想用albumin的抗体检测一下血清蛋白污染。

我跑过血浆的albumin，反正超离1次，albumin还残留非常多。
也有可能是我吸的，不敢吸完，还剩一点液体，里面很多albumin
作者: JKF    时间: 2018-1-15 20:20
大家好 我最近也在用超离分离血清外泌体。 请问超速离心提取小鼠血清外泌体大概需要多少的血清呢，我今天用了将近1毫升的血清，PBS补齐到13.2毫升， 100000g离心力离心两次，每次70分钟，最后沉淀看不到
作者: baishixiaoyaozi    时间: 2018-1-16 03:25
ronaldchen 发表于 2018-1-15 14:15
你好，你是吸的还是倒的啊，我是1ml稀释到12ml超离10g 2小时，吸到剩一点，最后跑WB做不出来，不知道是不 ...

吸的，不敢倒。plamsa第一次超离后，吸取上清，加PBS洗，再超离。我一般吸到最后一点会把管子倾斜，然后吸掉管壁上残留的液体。
作者: ronaldchen    时间: 2018-1-17 14:10
baishixiaoyaozi 发表于 2018-1-16 03:25
吸的，不敢倒。plamsa第一次超离后，吸取上清，加PBS洗，再超离。我一般吸到最后一点会把管子倾斜，然后 ...

也就是说，您吸到最后还剩一点倾斜，还是完全把液体吸干了的？
我之前是留了一点，
可以试试您的方法
作者: baishixiaoyaozi    时间: 2018-1-17 22:09
ronaldchen 发表于 2018-1-17 14:10
也就是说，您吸到最后还剩一点倾斜，还是完全把液体吸干了的？
我之前是留了一点，
可以试试您的方法 ...

倾斜，让残留的液体沿着管壁流下来，尽量吸干。
作者: 1010275183    时间: 2019-3-13 16:28
JKF 发表于 2018-1-15 20:20
大家好 我最近也在用超离分离血清外泌体。 请问超速离心提取小鼠血清外泌体大概需要多少的血清呢，我今天用 ...

我也遇到同样的问题，请问你是怎么解决的呢
作者: anlinyuan    时间: 2019-3-27 14:49
请问您用多大的离心管呢？



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