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标题: 求外泌体western上样量? [打印本页]

作者: xiaodoudou    时间: 2016-11-15 09:17
标题: 求外泌体western上样量?
各位大神,你们跑western的时候,蛋白上样量在什么范围内呢?

作者: baishixiaoyaozi    时间: 2016-11-15 12:06
5-10 ug is enough for the detection of TSG101,CD63,Flotlin 1 in my experiments (using rodent primary astrocytes and neurons).
作者: xiaodoudou    时间: 2016-11-15 14:14
本帖最后由 xiaodoudou 于 2016-11-15 14:16 编辑

thank you . 还有一个问题,我的外泌体提了很久了,-20有两周了,还能用吗?  
作者: 土豆    时间: 2016-11-15 14:18
xiaodoudou 发表于 2016-11-15 14:14
thank you . 还有一个问题,我的外泌体提了很久了,-20有两周了,还能用吗?   ...

做WB应该没问题
作者: peggy4598690    时间: 2017-10-17 13:37
请问楼主,我的外泌体超离后浓度极低,只有0.13ug/ml,这样可以使用2ug的上样量吗,会太少吗?

作者: lz93046    时间: 2017-11-2 16:14
10ul可以的
作者: 步步唧唧    时间: 2017-11-7 21:04
peggy4598690 发表于 2017-10-17 13:37
请问楼主,我的外泌体超离后浓度极低,只有0.13ug/ml,这样可以使用2ug的上样量吗,会太少吗?
...

问一下ug/ml是BCA定的量吧?超离的外泌体要裂解再BCA吗?
作者: peggy4598690    时间: 2017-11-17 02:41
步步唧唧 发表于 2017-11-7 21:04
问一下ug/ml是BCA定的量吧?超离的外泌体要裂解再BCA吗?

是BCA测出的浓度,我看到有人说外泌体要裂解,有人说不用,好像都跑得出来(我是有裂解的),我后来用2ug上样,有明显CD81条带
作者: zhaorui1993    时间: 2018-3-28 15:14
peggy4598690 发表于 2017-11-17 02:41
是BCA测出的浓度,我看到有人说外泌体要裂解,有人说不用,好像都跑得出来(我是有裂解的),我后来用2ug上 ...

你好,想问一下,你转膜的条件,我一直做不出来,求助
作者: peggy4598690    时间: 2018-5-10 21:14
zhaorui1993 发表于 2018-3-28 15:14
你好,想问一下,你转膜的条件,我一直做不出来,求助

是很一般的western blot,沒什麼特別條件,就是exosome要多收一點,然後用PBS懸浮的時候不要用太多,才不會跑BCA的時候測不到蛋白濃度




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