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标题: 跪求外泌体RNA的提取方法？ [打印本页]
作者: xiaodoudou    时间: 2016-11-23 10:11
标题: 跪求外泌体RNA的提取方法？
各位大神，你们都是怎么提取外泌体中的RNA的呢？用nanodrop能测出浓度吗？
作者: woshiyywlly    时间: 2016-11-23 18:22
直接加trizol提
作者: xiaodoudou    时间: 2016-11-23 19:00
woshiyywlly 发表于 2016-11-23 18:22
直接加trizol提

那你用酒精沉淀了吗？我感觉到最后RNA都给整没了？
作者: baishixiaoyaozi    时间: 2016-11-24 04:44
我们实验室提microRNA，先用Trizol裂解，然后再用Ambion试剂盒提取。含量确实不高，不过real time－PCR够用了。
另外：你用多少exosomes？我们用8－10个T150 flasks的上清超离。
作者: xiaodoudou    时间: 2016-11-24 14:42
baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-24 04:44
我们实验室提microRNA，先用Trizol裂解，然后再用Ambion试剂盒提取。含量确实不高，不过real time－PCR够用 ...

我差不多用的是70ML细胞上清，只不过超离沉淀时我先用PBS 重悬起来了，没有直接TRIZOL裂解。这加trizol比例怎么定好呢？
作者: baishixiaoyaozi    时间: 2016-11-24 22:48
xiaodoudou 发表于 2016-11-24 14:42
我差不多用的是70ML细胞上清，只不过超离沉淀时我先用PBS 重悬起来了，没有直接TRIZOL裂解。这加trizol比 ...

我们实验室用的是35ml离心管，弃去上清后，加200ul Trizo就l可以铺满管底了。
作者: wxz    时间: 2016-11-25 13:27
沉淀出Exosomes后用Trizol法提RNA时，建议使用糖原，可以促进核酸溶解，提高RNA得率
作者: xiaodoudou    时间: 2016-11-28 11:15
baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-24 22:48
我们实验室用的是35ml离心管，弃去上清后，加200ul Trizo就l可以铺满管底了。 ...

后期是用酒精洗沉淀，DEPC水溶解测浓度吗？
作者: xiaodoudou    时间: 2016-11-28 11:17
wxz 发表于 2016-11-25 13:27
沉淀出Exosomes后用Trizol法提RNA时，建议使用糖原，可以促进核酸溶解，提高RNA得率 ...

您的意思是往DEPC水里加糖原吗？是什么原理啊？
作者: wxz    时间: 2016-11-28 17:01
是用异丙醇沉淀RNA时加入糖原，糖原可以促进核酸的溶解
作者: wxz    时间: 2016-11-28 17:02
xiaodoudou 发表于 2016-11-28 11:17
您的意思是往DEPC水里加糖原吗？是什么原理啊？

糖原是在加入异丙醇沉淀RNA时加入；糖原可以促进核酸溶解
作者: baishixiaoyaozi    时间: 2016-11-28 21:46
xiaodoudou 发表于 2016-11-28 11:15
后期是用酒精洗沉淀，DEPC水溶解测浓度吗？

之后过柱，70％酒精洗，最后用RNase free water洗脱，测浓度
作者: xiaodoudou    时间: 2016-11-29 14:31
wxz 发表于 2016-11-28 17:02
糖原是在加入异丙醇沉淀RNA时加入；糖原可以促进核酸溶解

Thank you
作者: xiaodoudou    时间: 2016-11-29 14:32
baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-28 21:46
之后过柱，70％酒精洗，最后用RNase free water洗脱，测浓度

谢谢
作者: 阿赵    时间: 2018-12-22 11:05
wxz 发表于 2016-11-28 17:01
是用异丙醇沉淀RNA时加入糖原，糖原可以促进核酸的溶解

请问下异丙醇和糖原的比例是多少呀？
作者: 阿赵    时间: 2018-12-22 11:16
baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-28 21:46
之后过柱，70％酒精洗，最后用RNase free water洗脱，测浓度

请问酒精到底用70%还是75%的呀？有区别吗，
作者: baishixiaoyaozi    时间: 2018-12-26 21:18
阿赵 发表于 2018-12-22 11:16
请问酒精到底用70%还是75%的呀？有区别吗，

没区别，都可以。
作者: 子小匕禾页非文    时间: 2019-1-15 15:31
阿赵 发表于 2018-12-22 11:05
请问下异丙醇和糖原的比例是多少呀？

请问异丙醇和糖原的比例是多少呀
作者: 子小匕禾页非文    时间: 2019-1-15 17:27
wxz 发表于 2016-11-28 17:01
是用异丙醇沉淀RNA时加入糖原，糖原可以促进核酸的溶解

请问糖原比例怎么加啊，通常上清和异丙醇1：1，之后糖原再加多少呀
作者: MMM    时间: 2021-1-9 13:21
子小匕禾页非文 发表于 2019-1-15 17:27
请问糖原比例怎么加啊，通常上清和异丙醇1：1，之后糖原再加多少呀

请问你知道糖原怎么加了吗 加糖原提的RNA可以用来做二代测序吗
作者: 桃子味气泡水    时间: 2021-5-4 21:48
baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-24 04:44
我们实验室提microRNA，先用Trizol裂解，然后再用Ambion试剂盒提取。含量确实不高，不过real time－PCR够用 ...

请问您是测出RNA浓度后，用不同样本的相同量的RNA进行逆转录吗？技术支持说外泌体RNA太少，可以直接进行RT-qPCR，但是我疑惑：不同样本CT值相差太大怎么办，还是说每个样本都先用内参去摸索合适浓度的DNA模板从而调控CT值？



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