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标题: Qiagen试剂盒提取的外泌体电镜图片，磷钨酸负染，求鉴定~ [打印本页]

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作者: 完颜云裳    时间: 2016-11-27 11:12
标题: Qiagen试剂盒提取的外泌体电镜图片，磷钨酸负染，求鉴定~
如图，我提的是1000ul人血清，每次都会有这样的小球样的东东，但是放大看又没有立体结构，是不是应该换负染方法呢？？

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作者: 惜名    时间: 2016-11-27 11:46
我们用SBI提取的，做了好几次电镜，也出现过类似的图片。。。
我们是让电镜室的老师帮忙制片的，反复几次，换了不同的老师，才拿到比较满意的图（虽然也不是很完美）。。。
我感觉，拍电镜这个东西，和技术关系很大，如果电镜室的老师没做过外泌体，那极有可能出来的图就是一塌糊涂。。。

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作者: hzangs    时间: 2016-11-27 12:51
我打血清样品看到过类似的结构。 可能是血液中的脂蛋白。 比如LDL  o(╯□╰)o  纯属猜测 ~~

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作者: 完颜云裳    时间: 2016-11-27 17:55
噢，谢谢各位，本来我也深表怀疑，看来还得继续努力

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作者: 木木叉    时间: 2016-11-28 11:21
第二张隐约可以看到点立体结构，我推测可能是外泌体，只是可能负染做的不太好，所以看着模糊。

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作者: 子非鱼    时间: 2016-12-3 22:55
我觉得关注的地方不太对，是不是该看较黑色的部分，那些地方看着还有些双层结构

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作者: 崔雪娇123    时间: 2016-12-24 12:47

惜名 发表于 2016-11-27 11:46
我们用SBI提取的，做了好几次电镜，也出现过类似的图片。。。
我们是让电镜室的老师帮忙制片的，反复几次， ...

你好，你用SBI提的外泌体是血清的吗 ，用多少血清提的，溶在多少PBS里呢

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作者: 惜名    时间: 2016-12-24 20:21

崔雪娇123 发表于 2016-12-24 12:47
你好，你用SBI提的外泌体是血清的吗 ，用多少血清提的，溶在多少PBS里呢

我是做的细胞上清。。。

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作者: 崔雪娇123    时间: 2016-12-27 22:57

惜名 发表于 2016-12-24 20:21
我是做的细胞上清。。。

也是SBi试剂盒提的吗？多少上清提的呢，溶多少PBS中

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作者: 五月灼蓁    时间: 2017-2-23 11:49

惜名 发表于 2016-12-24 20:21
我是做的细胞上清。。。

清问一下，你使用多少细胞上清液体外泌体，提完后用多少重旋，多大的浓度上电镜的？还有能否说下电镜的具体步骤

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作者: qq783125623    时间: 2017-4-13 16:50
凯杰的试剂盒感觉有点问题，做出来都是这种效果，跟超离差距很大

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作者: 完颜云裳    时间: 2017-5-16 17:00

qq783125623 发表于 2017-4-13 16:50
凯杰的试剂盒感觉有点问题，做出来都是这种效果，跟超离差距很大

真有点这种感觉，打算加上胶体金，但是不知道怎么操作

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作者: gengshikun123    时间: 2018-4-16 01:15
谢谢分享

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作者: huangjingwei24    时间: 2018-4-18 16:06
换超速离心的方法吧，电镜图会比较纯净。我用过Qiagen试剂盒来提取外泌体，蛋白质污染极其严重，做出来的电镜图片效果也类似。后来换成超速离心就好多了。

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作者: 805580262    时间: 2018-10-22 15:31

huangjingwei24 发表于 2018-4-18 16:06
换超速离心的方法吧，电镜图会比较纯净。我用过Qiagen试剂盒来提取外泌体，蛋白质污染极其严重，做出来的电 ...

请问使用QIAGEN试剂盒说明书说最后需要用400微升的洗脱液之后需要纯化么？

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作者: 啦啦啦外泌体    时间: 2018-11-5 16:59
求问你试剂盒打电镜图之前有没有用PBS超滤，洗了多少次啊？因为我打出来的盐很厚，根本找不到囊泡。

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