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标题: 超滤管使用问题 [打印本页]
作者: 八戒在五湖    时间: 2017-7-22 15:32
标题: 超滤管使用问题
新买的Millipore 100kd的超滤管，现在有以下几个问题：浓缩细胞上清前是不是要把滤膜润湿，润湿的话用什么液体？无菌PBS行不行？
超滤转速一般是不是4000g，50-60min？
使用完后怎么清洗，我们实验室3kD那种小的超滤管，是先用0.1M NaOH清洗，然后20%乙醇清洗，再把滤膜浸泡在20%乙醇里，不知道这个能不能这么操作，
请知道的同学答疑解惑

作者: 小苗    时间: 2017-7-24 09:35
超滤管使用前用PBS洗涤就可以，用后如果 要重复利用的话，按照你上面的方法，使用0.1M NaOH清洗，然后再使用ddH2O清洗，最后短期内使用的话，保存在PBS里就可以，长期不使用的话，保存在乙醇里
作者: 八戒在五湖    时间: 2017-7-24 10:46
小苗 发表于 2017-7-24 09:35
超滤管使用前用PBS洗涤就可以，用后如果 要重复利用的话，按照你上面的方法，使用0.1M NaOH清洗，然后再使 ...

恩恩，谢谢
作者: lczyld    时间: 2017-9-1 11:50
小苗 发表于 2017-7-24 09:35
超滤管使用前用PBS洗涤就可以，用后如果 要重复利用的话，按照你上面的方法，使用0.1M NaOH清洗，然后再使 ...

您好，老师，请问一下， 我买了一个Amicon Ultra-15 100K NMWL进行超滤浓缩细胞培养液提取外泌体，这管子使用前要灭菌么，要做处理么？还有，我想重复利用，毕竟比较贵，怎么保存？就是按照上面的回复泡在PBS里面么？能详细说下么，万分感谢！实验室里没用过这个管子、、、
作者: 小苗    时间: 2017-9-1 16:47
lczyld 发表于 2017-9-1 11:50
您好，老师，请问一下， 我买了一个Amicon Ultra-15 100K NMWL进行超滤浓缩细胞培养液提取外泌体，这管子 ...

不用灭菌，使用0.1M氢氧化钠洗涤，3000rpm，离心5min，然后使用ddH20洗涤两次，每次3000rpm，离心5min，然后放在PBS里就可以了
作者: lczyld    时间: 2017-9-2 16:05
小苗 发表于 2017-9-1 16:47
不用灭菌，使用0.1M氢氧化钠洗涤，3000rpm，离心5min，然后使用ddH20洗涤两次，每次3000rpm，离心5min， ...

因为怕操作不正确，按您说的 ，我是这样理解的不知道可对：使用前用PBS洗下内管外管，使用后为了下一次使用，做以下步骤：1、0.1M氢氧化钠洗涤，3000rpm，离心5min。2、然后使用ddH20洗涤，即内管加满ddH20，3000rpm，离心5min。重复一次。3、洗涤完之后，内管泡在无菌pbs里。
不对之处，请您指正下，想正确使用这种管子。
作者: 小苗    时间: 2017-9-5 17:23
lczyld 发表于 2017-9-2 16:05
因为怕操作不正确，按您说的 ，我是这样理解的不知道可对：使用前用PBS洗下内管外管，使用后为了下一次使 ...

没问题，可以的
作者: qyjinghui    时间: 2017-9-14 09:02
小苗 发表于 2017-7-24 09:35
超滤管使用前用PBS洗涤就可以，用后如果 要重复利用的话，按照你上面的方法，使用0.1M NaOH清洗，然后再使 ...

老师您好，请教您一个问题，Millipore 100kd的超滤管，超滤转速是多少？是不是4000g，50-60min？最后大概需要用多少pbs洗膜呢？盼老师有时间能予以指点，不胜感激！
作者: 小苗    时间: 2017-9-14 13:55
qyjinghui 发表于 2017-9-14 09:02
老师您好，请教您一个问题，Millipore 100kd的超滤管，超滤转速是多少？是不是4000g，50-60min？最后大概 ...

转速的问题，要看说明书，有具体的转速的限制的，时间最好一次不要那么久，20-30分钟一次就不错了，时间太久容易导致蛋白变性，且速度也没那么快。使用PBS洗个2-3次，每次10ml左右就可以
作者: qyjinghui    时间: 2017-9-14 14:09
小苗 发表于 2017-9-14 13:55
转速的问题，要看说明书，有具体的转速的限制的，时间最好一次不要那么久，20-30分钟一次就不错了，时间 ...

好的，谢谢老师，我说的洗膜指的是用pbs把沉降在滤膜上的外泌体成分收集起来，每次大概需要多少pbs重悬呢
作者: wmhgrace    时间: 2017-9-21 11:25
老师，请问要浓缩细胞培养上清的话需要多少Kd的超滤管啊，还有浓缩后的上清，和外泌体提取的试剂盒的应用比例还是说明书上面的比例吗，谢谢
作者: 烟尽云淡    时间: 2017-10-14 20:35
我想问下，超滤管能重复使用多少次呢？
作者: yangyue1984    时间: 2018-12-17 18:48
qyjinghui 发表于 2017-9-14 09:02
老师您好，请教您一个问题，Millipore 100kd的超滤管，超滤转速是多少？是不是4000g，50-60min？最后大概 ...

您好，请问您使用超滤管的时候是离心后收集下面的液体吗，怎么我超滤后离心下来的液体和之前加的差不多，是要取上面的？
作者: sringma1983    时间: 2018-12-23 10:30
yangyue1984 发表于 2018-12-17 18:48
您好，请问您使用超滤管的时候是离心后收集下面的液体吗，怎么我超滤后离心下来的液体和之前加的差不多， ...

是的，取上面的，上面的才是浓缩后的。



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