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标题: 细胞培养液中外泌体的提取步骤 [打印本页]
作者: lczyld 时间: 2017-8-10 23:00
标题: 细胞培养液中外泌体的提取步骤
本人最近在准备提取细胞培养液上清中的外泌体，准备按照以下步骤提：
一、conditioned medium (CM) 的收集
1、细胞种在100mm 培养皿中，正常培养基下培养，等密度达到75%左右。
2、弃去培养液，PBS洗3遍
3、加入10% exosome-free serum的DMEM/F12培养液 10ML
4、培养箱中培养48小时后，开始处理细胞，进行MPC,HPC
5、处理完成后用无菌离心管，收集各组细胞培养液。
6、收集的CM，4℃ 300g 10min 去除残存细胞，4℃ 2000g 20min 去除细胞碎片等。
7、得到的上清液，经 0.22μm 滤器过滤，转移至 Amicon Ultra-15 100K NMWL 进行超滤浓缩 得到浓缩后的上清
然后按照ExoQuick-TC Exosome Precipitation Solution (System Biosciences) 的试剂盒步骤进行提取。
有没有前辈和做过的大神给予些指导呀？万分感谢！
作者: chrismoring 时间: 2017-8-11 21:16
请问您培养的什么细胞？
作者: lczyld 时间: 2017-8-12 08:49
培养的是 H9C2
作者: huang_0207 时间: 2017-8-13 09:27
进行MPC,HPC是什么意思啊
作者: 八戒在五湖 时间: 2017-8-13 14:17
我用超滤然后用试剂盒提过一次，60mL超滤出来就几百微，颜色是深红色，试剂盒提完之后跑WB，CD9,CD63没条带
作者: chrismoring 时间: 2017-8-13 18:15
您是用SBI的试剂盒吗
作者: 八戒在五湖 时间: 2017-8-14 08:53
是的，SBI
作者: lczyld 时间: 2017-8-28 14:51
请问后来您是怎么处理的？
作者: lczyld 时间: 2017-9-1 08:47
这个不重要，是我们的药物处理 。请问你也做这个么，可以交流交流下
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