effiezhang66 发表于 2015-4-23 11:30
好赞,求TEM制样过程,大神!!!!
hzangs 发表于 2015-4-23 11:35
exosomes样品10ul 铜网上沉淀1分钟,吸水纸吸去多余液体;负染1分钟,吸水纸吸去多余液体。上机 。
应该 ...
effiezhang66 发表于 2015-4-23 11:40
这样的样本可以储存吗?因为是在别的单位约电镜的
effiezhang66 发表于 2015-4-23 11:49
大神,求问10ul的重悬液是PBS吗?
微泡biomarker 发表于 2015-4-23 21:34
问一下 负染的 染料是什么啊
hzangs 发表于 2015-4-23 11:51
是的。 我将大概2000万 tumor cell 分泌的exosomes 用30ul PBS 充分重悬的。
hzangs 发表于 2015-4-23 11:51
是的。 我将大概2000万 tumor cell 分泌的exosomes 用30ul PBS 充分重悬的。
大琳宝儿 发表于 2015-4-28 13:23
我用PBS重新混悬,沉淀不太溶解啊~需要超声? 不知道大家是不是也这样 嘿嘿 ...
kadak007 发表于 2015-4-28 18:50
请问下,2000万的细胞是个怎样的概念:25cm规格的培养瓶多少瓶呢?还是用75cm规格的?
谢谢~ ...
微泡biomarker 发表于 2015-4-23 21:34
问一下 负染的 染料是什么啊
hzangs 发表于 2015-4-23 11:35
exosomes样品10ul 铜网上沉淀1分钟,吸水纸吸去多余液体;负染1分钟,吸水纸吸去多余液体。上机 。
应该 ...
jp3266726 发表于 2015-7-5 14:03
你好~ 能请教你一下,你看电镜时滴的外泌体样的浓度吗?我做的电镜效果感觉总是叠在一起,浓度不好掌握, ...
effiezhang66 发表于 2015-4-23 11:40
这样的样本可以储存吗?因为是在别的单位约电镜的
微泡biomarker 发表于 2015-4-23 21:34
问一下 负染的 染料是什么啊
hereissyk 发表于 2015-4-24 15:53
同问具体负染了什么,谢谢!
好时之梦 发表于 2015-8-30 00:13
请问大神是用超离,还是用kit提的
SHANKUN 发表于 2015-12-4 22:57
超速离心大概的步骤是什么啊。用多少g呢?
hzangs 发表于 2015-12-5 10:35
2000g 10min 取上清
10000g 30min 取上清
子非鱼 发表于 2015-12-14 11:56
简洁有力,赞!
hzangs大神,请教一个问题,你提取细胞上清外泌体前,细胞是用无血清培养基培养的?还是 ...
hzangs 发表于 2015-12-14 13:59
我是过夜超离血清制作exosome-free FBS,然后用这个FBS配培液养细胞。 具体的流程 可以参考我之前的帖子 ...
修行医者 发表于 2015-12-16 10:16
大神,没有nanosight,有什么替代方法可以测量size和浓度啊
hzangs 发表于 2015-4-26 14:12
染料是一种 铀盐,具体是硫酸铀还是醋酸铀 我记不清了… 以后对事儿了,我去我们院的电镜室再问问吧 ...
xinyi717 发表于 2016-3-28 20:33
请问一下 pbs 是买的公司的吗,感觉自己配的1xpbs 会有杂质呢,感觉影响观察~谢谢 ...
大琳宝儿 发表于 2015-4-28 13:23
我用PBS重新混悬,沉淀不太溶解啊~需要超声? 不知道大家是不是也这样 嘿嘿 ...
微泡biomarker 发表于 2016-4-18 09:28
问一下 大家 在制样过程中都不需要稀释吗,我之前的电镜下 看到了 好多盐颗粒, 电竞老师说需要稀释一下呢 ...
hzangs 发表于 2016-4-18 09:44
我是超速离心分离得到的样品。 没有稀释~
微泡biomarker 发表于 2016-4-18 14:09
那问一下 在电镜下会看到 盐颗粒吗 ,我的 总是背景不干净呢?
hzangs 发表于 2016-4-18 16:30
我的电镜结果里 没有看到盐颗粒。你看到的盐颗粒 可能是因为铜网沉积的时候 PBS太多了,一干燥 就出颗 ...
zyjjxb 发表于 2016-4-20 22:22
用kit的怎么处理,方法一样吗
allen123 发表于 2016-4-24 12:26
你好,请问外泌体做电镜上样前需要固定吗?
我们是SBI试剂沉淀外泌体后重悬,稀释后直接10ul上样,1min,滤 ...
hengheng37 发表于 2016-6-14 16:37
大神你好!我想问一下在制作投射电镜样本之前,外泌体需要用固定液固定吗 ...
微泡biomarker 发表于 2016-6-21 20:21
请问一下这个醋酸双氧铀的染料是买配好的呢,还是自己买粉末配呢,有没有货号之类的可以提供参考呢,谢谢 ...
hzangs 发表于 2016-6-21 22:25
微泡兄 这个我也不知道o(╯□╰)o 我当时去打电镜 是我们这边电镜室 已经给准备好的 ...
hzangs 发表于 2015-4-23 11:51
是的。 我将大概2000万 tumor cell 分泌的exosomes 用30ul PBS 充分重悬的。
sonja_forever 发表于 2016-8-26 12:54
请教一下,细胞培养上清在分离exosomes之前可以暂存在什么温度?4℃可以放几天呢,放-20℃可以吗?多谢啦 ...
hzangs 发表于 2016-8-26 17:18
4° 放1个星期 打电镜 没问题。
sonja_forever 发表于 2016-8-26 19:36
谢谢大牛~但我有些培养上清放在负20了,不知道还能不能用……
今日事今日毕 发表于 2016-9-6 10:37
楼主,我想问一下,图片上那么多的线线干嘛用的?
hzangs 发表于 2016-9-8 11:25
线是为了防止别人盗图,故意打上去的
hzangs 发表于 2016-8-28 12:19
额 培液上清直接放-20的话 很可能就没办法用了。 我之前也尝试过,包括一个同学也尝试过,放在-20 超 ...
dancing 发表于 2016-10-8 08:23
请问一下,你得电镜图下面的标尺是照电镜的时候自动打上去的吗,还是后期处理的 ...
dancing 发表于 2016-10-12 09:19
拍电镜的时候是用的多大的放大倍数啊,我在学校拍的电镜标尺显示的都是200nm ...
陆峰彬 发表于 2016-10-13 21:36
请教楼主,我们电镜室让我用一种固定的方法染外泌体,不然容易损坏电镜,不知楼主有没有相关了解,谢谢! ...
陆峰彬 发表于 2016-10-13 21:36
请教楼主,我们电镜室让我用一种固定的方法染外泌体,不然容易损坏电镜,不知楼主有没有相关了解,谢谢! ...
hzangs 发表于 2015-4-23 11:51
是的。 我将大概2000万 tumor cell 分泌的exosomes 用30ul PBS 充分重悬的。
xunqiben 发表于 2017-2-8 13:30
2000万cell分泌多久得到的?会不会太过于粘稠,30ul体系没办法吸取?
xiapqunqun 发表于 2017-3-14 16:36
请问下楼主,看电镜的蛋白浓度多少合适,太高电镜下看不到
zhousisi0223 发表于 2017-3-15 15:30
大神,请问一下,拍透射的时候没有负染这一步可以拍出来吗?
malingran 发表于 2017-3-15 17:21
还需要用PFA固定么?楼主
hzangs 发表于 2015-4-23 11:42
我打过4°保存几天的样品。 这样的样品 打出来的exosomes 容易抱团,但是还能凑合用,能挑到可以上figure ...
afra 发表于 2017-4-12 09:52
请问大神,这个磷钨酸负染的原理是什么?还有外泌体固定一下电镜片子可以保存久一些?谢谢 ...
hzangs 发表于 2016-8-28 12:19
额 培液上清直接放-20的话 很可能就没办法用了。 我之前也尝试过,包括一个同学也尝试过,放在-20 超 ...
sunshineZY 发表于 2017-5-1 21:13
求问大神,用磷钨酸复染可以吗?与醋酸双氧铀复染有什么区别,哪个更好一些? ...
sunshineZY 发表于 2017-5-3 14:54
刚刚做的磷钨酸复染外泌体电镜,没有看到大神这样的外泌体。也不知道自己的是不是,问题出在哪里,想请大神 ...
sunshineZY 发表于 2017-5-3 16:21
刚一直没有上传成功图片,现在请您看看这几张。是染色问题还是没有外泌体? ...
hzangs 发表于 2017-3-1 10:42
不会有问题的。 充分的吹打 吹打完了 过于粘稠的部分就不要了。 为了电镜 我直接用掉了这一批样本 ...
kerstin_yang 发表于 2017-6-5 16:37
请教版主,怎样才叫充分吹打呢?这个又不像吹细胞,能看得到沉淀被吹没了。不知道外泌体可以涡旋振荡一下 ...
hzangs 发表于 2015-4-29 11:18
我用的细胞 25cm培养皿 一个长满基本上是1000w细胞。
hzangs 发表于 2015-4-23 11:35
exosomes样品10ul 铜网上沉淀1分钟,吸水纸吸去多余液体;负染1分钟,吸水纸吸去多余液体。上机 。
应该 ...
hzangs 发表于 2015-4-29 11:18
我用的细胞 25cm培养皿 一个长满基本上是1000w细胞。
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