外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用

标题: 用于exosome提取的无血清培养基怎么制备？ [打印本页]
作者: yy8651    时间: 2015-4-23 17:18
标题: 用于exosome提取的无血清培养基怎么制备？
之前记得在哪里看过版主说过去exosome血清的制备方法，具体细节还是不清楚，有哪位做过了吗？

血清20%+培养基80%稀释之后，0.22微米滤器过滤，高速离心11000g*4小时这样就可以了吗？



作者: yy8651    时间: 2015-4-23 18:08
Johnny 发表于 2015-4-23 18:01
用你的基培将血清配成20%，超速离心 110000g 过夜

需要过滤吗？离心时间多久？
作者: yy8651    时间: 2015-4-23 18:59
Johnny 发表于 2015-4-23 18:39
可以离心完 再过滤。离心最好大于10h

非常感谢，那我打算离心12小时。离心力多大呢？11000g是否足够？
作者: yy8651    时间: 2015-4-23 19:35
Johnny 发表于 2015-4-23 19:29
11W g

好的，谢谢
作者: luckkit    时间: 2015-4-24 12:25
本人近期正在试验从完全无血清的培养上清中分离EXO，似乎纯度不错，虽然产量低一些，待进一步验证后与大家交流。
作者: hereissyk    时间: 2015-4-24 15:48
luckkit 发表于 2015-4-24 12:25
本人近期正在试验从完全无血清的培养上清中分离EXO，似乎纯度不错，虽然产量低一些，待进一步验证后与大家 ...

后续功能学实验可能会有问题。
作者: hereissyk    时间: 2015-4-24 15:50
Johnny 发表于 2015-4-23 19:29
11W g

超离机过夜真不会出事吗。。。
作者: yy8651    时间: 2015-4-24 16:20
luckkit 发表于 2015-4-24 12:25
本人近期正在试验从完全无血清的培养上清中分离EXO，似乎纯度不错，虽然产量低一些，待进一步验证后与大家 ...

非常欢迎交流。
作者: yy8651    时间: 2015-4-28 13:45
超速离心之后是否需要鉴定血清中是否还残存exosome？
超离之后，血清底部会有一层层的悬浮物，吸取时需要丢弃多少？
作者: bobo    时间: 2015-5-26 19:52
yy8651 发表于 2015-4-28 13:45
超速离心之后是否需要鉴定血清中是否还残存exosome？
超离之后，血清底部会有一层层的悬浮物，吸取时需要丢 ...

是的，要丢弃多少呢
作者: yy8651    时间: 2015-5-26 21:55
bobo 发表于 2015-5-26 19:52
是的，要丢弃多少呢

我也在问这个问题
作者: 木瓜31    时间: 2015-7-11 13:22
Johnny 发表于 2015-4-23 18:01
用你的基培将血清配成20%，超速离心 110000g 过夜

为什么要稀释成20%，其他比例可以吗？是因为血清的粘性大？
作者: liuhaoisboy    时间: 2015-12-10 11:20
是去除外泌体了的10%血清培基吧。
作者: liuhaoisboy    时间: 2015-12-10 11:26
luckkit 发表于 2015-4-24 12:25
本人近期正在试验从完全无血清的培养上清中分离EXO，似乎纯度不错，虽然产量低一些，待进一步验证后与大家 ...

大家都知道不同细胞、不同状态、不同环境分泌的外泌体有所不同。你这样不给细胞完全的生长环境，提取的外泌体不担心吗？求教
作者: yy8651    时间: 2015-12-10 11:38
liuhaoisboy 发表于 2015-12-10 11:26
大家都知道不同细胞、不同状态、不同环境分泌的外泌体有所不同。你这样不给细胞完全的生长环境，提取的外 ...

我认为这种方法提取所得大部分是凋亡小体
作者: liuhaoisboy    时间: 2015-12-10 11:42
yy8651 发表于 2015-12-10 11:38
我认为这种方法提取所得大部分是凋亡小体

这样提出来的"外泌体"应该值得商榷
作者: luckkit    时间: 2015-12-22 05:18
liuhaoisboy 发表于 2015-12-9 21:42
这样提出来的"外泌体"应该值得商榷

我们做过Nanosight， 绝大部分小于100nm，凋亡小体似乎比这个大还是符合外泌体的定义的。
此外，我们还进行了WB验证，Markers和阴性对照均符合预期。
作者: hzangs    时间: 2015-12-23 09:42
luckkit 发表于 2015-12-22 05:18
我们做过Nanosight， 绝大部分小于100nm，凋亡小体似乎比这个大还是符合外泌体的定义的。
此外，我们还进 ...

有些细胞对血清饥饿的耐受情况比较好， 所以在无血清培养基的培养下 发生凋亡的时间会比较晚，因此还是可以分到exosome。 只是有些细胞 可能确实会收不到exosome了
作者: zierzier    时间: 2015-12-23 11:01
请问大家，对血清进行超离处理去除外泌体，如何保证血清不被污染呢？
作者: 子非鱼    时间: 2015-12-23 14:10
yy8651 发表于 2015-4-23 18:59
非常感谢，那我打算离心12小时。离心力多大呢？11000g是否足够？

你少了一个0
作者: stones    时间: 2016-6-22 09:52
luckkit 发表于 2015-12-22 05:18
我们做过Nanosight， 绝大部分小于100nm，凋亡小体似乎比这个大还是符合外泌体的定义的。
此外，我们还进 ...

也想尝试一下MSC能否用无血清培养后提取exo，请问你培养的是什么细胞呢？
作者: vincent    时间: 2016-7-11 08:45
luckkit 发表于 2015-12-22 05:18
我们做过Nanosight， 绝大部分小于100nm，凋亡小体似乎比这个大还是符合外泌体的定义的。
此外，我们还进 ...

你好，nanosight的宝贵经验可否分享一下。我也打算在实验设计里面加入。但是还没具体认识448326307@qq.com。万谢
作者: 下里巴人    时间: 2016-7-22 11:07
”超速离心之后是否需要鉴定血清中是否还残存exosome？
超离之后，血清底部会有一层层的悬浮物，吸取时需要丢弃多少？“
这个问题没人回答吗？望各位不吝赐教！
作者: 下里巴人    时间: 2016-7-22 11:08
yy8651 发表于 2015-4-28 13:45
超速离心之后是否需要鉴定血清中是否还残存exosome？
超离之后，血清底部会有一层层的悬浮物，吸取时需要丢 ...

有答案了吗？



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