大牛观点：蜜蜂从花朵采集花蜜并加工成蜂蜜的过程就好... - 外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用

最近，心血管领域大牛Eduardo Marbán 在心血管领域著名期刊J Am Coll Cardiol（IF=19.896）上发表评论，该评论提出一个十分新颖的观点，将外泌体比作蜂蜜，蜜蜂从花朵采集花蜜并加工成蜂蜜的过程就好比我们从细胞采集培养上清并加工成外泌体的过程。

细胞制成条件培养基，人类收集并加工成外泌体。这种高度人工的过程仅仅运行了几十年：外泌体在20世纪80年代首次得到认可。这与一亿年前产生的自然工作流程惊人地相似。鲜花生产花蜜，蜜蜂收集并加工成蜂蜜。在这两种情况下，起点都是一个脆弱的生物体（细胞或花朵）；中间体是生物液体（条件培养基或花蜜）; 而最终的可交付成果都是一种稳定的无细胞生物产品。

正如中央插图所描绘的那样，反思蜜蜂的方式使得我们开辟了新的方法来概念化我们的外泌体制造。毫不奇怪，蜜蜂制造蜂蜜的过程是高度发达和标准化的，从而导致比现有的外泌体制造技术更加可重复。蜜蜂从多朵花收集花蜜，并将其储存在专门的胃中，其中转化酶和其他酶开始将复杂的糖分解成单糖。蜜蜂的加工过程继续进行，工蜂反复循环、反复进食，进一步分解糖，逐步降低含水量。蜜蜂最终将加工过的花蜜放置在蜂巢细胞中，通过用翅膀煽动蜂蜜进一步浓缩液体，并用蜡盖密封每个细胞。因此，蜜蜂不只是收集和储存花蜜，他们也从化学上改变了它。当我们使用现有技术制造外泌体时，总体目标是净化而不是改变囊泡。与蜜蜂生产蜂蜜一样，我们常常努力改变外泌体的化学性质以增强它们的功效（例如，实现选择性靶向的共价修饰）。

细胞像花一样，是脆弱的生命形式。他们很容易死亡，他们的特性非常依赖于他们如何生长和维持。细胞疗法类似于园艺：其目标是培育珍贵的生物体，然后保护它们免受可预测的导致其退化的许多压力。与此相反，外泌体制造与蜜蜂的神秘生活相似。整个工作重点都是将生物液体加工成独特的无细胞产品。外泌体与蜂蜜一样，含有其来源的“有效成分”，但与这些来源有着根本的不同。外泌体和蜂蜜都是耐用的、无生命的实体。它们有独特的用途和应用; 不仅仅是它们各自来源的生命体的“代理者”。

我们对细胞治疗机制的理解已经使我们远离细胞而走向外泌体了。为什么不把关注点全部放在细胞治疗的细胞本身，而更多的放在外泌体上呢？尽管外泌体具有其自身的局限性，但是它们包含了比细胞疗法更多前景，没有将活细胞作为药物产品处理的无数麻烦。在这个观点中，细胞可能简单地成为制造外泌体的制造中间体。尽管如此，就像花朵有其独特的用途一样，细胞在某些适应症方面可能会比其外泌体更适合。血管内递送的细胞可以存留在毛细血管中并作为外泌体的天然缓释平台。时间最终会证明细胞疗法是否能够继续存在，或者是否会完全被外泌体取代，甚至最终是否会被确定的因子所取代。

为了制备外泌体，我们首先将分离的细胞铺板或悬浮在无血清培养基中，并让细胞产生条件性培养基（无血清培养基对于外泌体生产是优选的，因为血清每毫升含有数以万亿计的外泌体，使得当包含血清时不可能区分新分泌的和预先存在的外泌体）。培养步骤可以是几小时或长达15天。然后收集培养上清进一步处理。原始条件培养基不仅包含外泌体，还包含蛋白质和其他代谢产物。实验室人员的进一步处理通常涉及超滤以浓缩细胞上清并除去非细胞外膜泡成分。超速离心可以从更大的细胞外膜泡例如微泡或凋亡小体中分离得到外泌体。使用透析过滤来将培养基交换为期望的细胞外膜泡存储介质。最后，将纯化的产品包装成小瓶或其他剂量定义的单位，以备后用。

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