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标题: 外泌体蛋白鉴定 [打印本页]
作者: 胡杨    时间: 2018-1-23 16:39
标题: 外泌体蛋白鉴定
想请教一下，只跑出来了ALIX和TSG101，加上透射电镜和粒径图，可以证明我提取的是外泌体吗？
作者: hzangs    时间: 2018-1-23 19:44
可以了   最好能再补 CD63 CD9 CD81中的一个。 以及一个阴性对照
作者: Jinyi    时间: 2018-1-23 20:24
hzangs 发表于 2018-1-23 19:44
可以了   最好能再补 CD63 CD9 CD81中的一个。 以及一个阴性对照

您好，是所有的外泌体都能用这个做maker吗，其他生物的呢
作者: 胡杨    时间: 2018-1-24 22:55
hzangs 发表于 2018-1-23 19:44
可以了   最好能再补 CD63 CD9 CD81中的一个。 以及一个阴性对照

哦哦，谢谢您老师，再请教一下，我用的是细胞提的蛋白做的阳性对照可以吗？
作者: hzangs    时间: 2018-1-25 00:18
胡杨 发表于 2018-1-24 22:55
哦哦，谢谢您老师，再请教一下，我用的是细胞提的蛋白做的阳性对照可以吗？ ...

可以的。  
作者: 胡杨    时间: 2018-1-25 15:40
hzangs 发表于 2018-1-25 00:18
可以的。

好的，谢谢
作者: piruxiaofei    时间: 2018-1-26 17:04
请问楼主提取的是组织的还是培养液的？？
作者: 胡杨    时间: 2018-1-27 19:03
piruxiaofei 发表于 2018-1-26 17:04
请问楼主提取的是组织的还是培养液的？？

提取的是培养液
作者: hellzhu    时间: 2018-6-20 16:49
请问楼主细胞提的蛋白做的阳性对照，是怎么做的咧？谢谢
作者: 胡杨    时间: 2018-7-1 20:50
hellzhu 发表于 2018-6-20 16:49
请问楼主细胞提的蛋白做的阳性对照，是怎么做的咧？谢谢

就是和跑外泌体蛋白一样
作者: peggy4598690    时间: 2018-7-20 00:57
陽性對照應該是同時跑細胞跟外泌體的Western，然後看CD81之類的外泌體marker
作者: 纳米质面包    时间: 2018-10-9 12:20
请问楼主，跑之前有没有加细胞裂解液呀？如果加了的话按什么比例加的呀？
作者: teddy溶溶    时间: 2018-10-25 15:29
hzangs 发表于 2018-1-23 19:44
可以了   最好能再补 CD63 CD9 CD81中的一个。 以及一个阴性对照

你好请问一下，任何的细胞上清液提取的外泌体WB都可以用以上几种吗？
作者: 啦啦啦外泌体    时间: 2018-11-5 17:01
求问下阴性对照是怎么设的？用什么样品去设置啊？如果需要提取血浆中外泌体的话。
作者: 胡杨    时间: 2018-11-17 22:00
啦啦啦外泌体 发表于 2018-11-5 17:01
求问下阴性对照是怎么设的？用什么样品去设置啊？如果需要提取血浆中外泌体的话。 ...

我没有设置阴性对照，但是看顾一篇文献用的是Histone H3.  文献名字：Selective extracellular vesicle exclusion of miR-142-3p by oral cancer cells promotes both internal and extracellular malignant phenotypes.不过这是细胞来源的外泌体。
作者: mayday0324    时间: 2018-11-28 12:49
hzangs 发表于 2018-1-25 00:18
可以的。

外泌体蛋白做WB用什么内参基因？

外泌体做WB的内参基因一直存在争议。但是按照David Lyden曾发表于CNS的paper，actin和GAPDH 都可以的。
  老师，您好！请问能把这篇文章发我一下吗？实在没搜到 谢谢啦！老师，我的邮箱是 317192106@qq.com
作者: hzangs    时间: 2018-11-28 13:42
mayday0324 发表于 2018-11-28 12:49
外泌体蛋白做WB用什么内参基因？

外泌体做WB的内参基因一直存在争议。但是按照David Lyden曾发表于CNS的 ...

Tumour exosome integrins determine organotropic metastasis
作者: mayday0324    时间: 2018-11-30 09:15
hzangs 发表于 2018-11-28 13:42
Tumour exosome integrins determine organotropic metastasis

好的，非常谢谢老师您啦！老师，目前学生需要回复审稿人一个问题，就是用GAPDH做外泌体和细胞的WB内参，结果外泌体的GAPDH很弱，审稿人要求解释原因，不知该怎么解释，目前也找不到合适的参考文献，卡在这里了，不知老师您能抽空指导下，万分感谢老师您！
作者: zyy    时间: 2018-12-4 08:34
楼主请问，你的外泌体浓度大概是多少呢，细胞和外泌体的上扬量是一样的吗
作者: Caro    时间: 2019-1-2 12:27
不好意思各位大神，我想请教几个问题：1、我看有的写做WB验证外泌体标志蛋白的时候，分别要做外泌体和血清，我想问这个血清是同一来源没有提取过外泌体的血清，还是提取外泌体超离时弃掉的上清呀？但是上清里面已经有PBS了呀。2、我用的是患者的血清，比如说一个EP管里可能有500ul~1ml左右，但是我取的时候统一取500ul,那剩下的再冻回-80算不算反复冻融呀？要怎么解决这个问题呢？3、我今天提取血清外泌体，但是NTA得下周一才做，那我是应该放在-80还是4℃，还是说得下次新鲜提取了才能做NTA这次不能做了呢？4、大家每次送电镜，外泌体样本量是多少呀？50ul？
作者: weixiao    时间: 2020-6-29 21:36
hzangs 发表于 2018-1-25 00:18
可以的。

你好，我想请问下做阳性对照的时候，细胞蛋白上样量是要求和外泌体的量一样吗？那么应该是细胞条带更明显还是外泌体条带更明显了？我用的抗体是CD63和CD9，谢谢解答！
作者: cxx123    时间: 2023-6-26 23:17
胡杨 发表于 2018-7-1 20:50
就是和跑外泌体蛋白一样

老师，你好，我想问一下外泌体的标志蛋白跟细胞提的蛋白做对比吗？细胞的蛋白有跑出来吗？怎么衡量你提取的外泌体成功了，因为我细胞跑出来的标志蛋白也比较明显



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