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标题: 关于去exosomes血清制备的一些疑问总结 [打印本页]

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作者: yy8651    时间: 2015-5-8 20:59
标题: 关于去exosomes血清制备的一些疑问总结
各位坛友，最近在自己做去exosomes的血清，有些疑问与大家分享，请有经验的朋友帮忙解答下，不胜感激！

1、去exosomes血清超离的最低有效时间和离心力是多少？
      有的说11万g*70min，有的说1小时，还有的说2小时，到底最低离心力和时间多少可以达到要求？

2、去exosomes血清制作时，离心后的液体，离心管内从上到下颜色逐渐加深，沉淀物不多，吸取时候到什么位置停止？
     也就是说，基本上到哪个位置开始出现exosomes？
     如图[attach]124[/attach]

3、去exosomes血清制备结束后，如何验证血清中是否还有exosomes？
      因为血清极易污染，不再进行超速离心能否验证？有没有其他方法验证

4、如何验证人类肿瘤细胞培养液中的exosomes是人源的，而不是来自血清中的？
     （因为培养前没有验证去exosomes血清中是否含有exosomes）

5、超速离心管超离结束后取出十分困难，容易污染血清，大家是怎么保证不会污染的？
[attach]125[/attach]

6、超离后的血清对细胞的生长状态有没有影响？

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作者: 惜名    时间: 2015-5-9 08:53
MARK。
各位做过的可以来讨论讨论，没钱的孩子真可怜。。。

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作者: wfmq    时间: 2015-6-3 13:45
赞！！请教楼主知不知道microvesicle提取方法？？和exosome有什么区别？？

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作者: yy8651    时间: 2015-6-3 16:08

wfmq 发表于 2015-6-3 13:45
赞！！请教楼主知不知道microvesicle提取方法？？和exosome有什么区别？？

额，这个真不知道

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作者: meme    时间: 2015-10-9 18:17
问题问的好，新手我也坐等答案。

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作者: ashey    时间: 2015-11-27 09:58
楼主得出答案了吗？求分享啊。

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作者: zjm337    时间: 2015-12-1 11:21
请问你这些问题都解决了吗？刚刚开始提取exosome也很纠结。。。期待你能分享一下你的经验，谢谢！

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作者: niceman1987    时间: 2015-12-2 20:22
我们是采用超离，100000g×5h/次×2次，然后0.22um滤器过滤，两次超离后得到的血清中看不到沉淀了，就认为是Exo-free了，但是也没有进一步的实验证明。

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作者: seallin    时间: 2015-12-2 21:03
质谱实验，一般细胞是用同位素SILAC标记的，鉴定有同位素标签则认为是细胞来源的，这个肯定准，但是成本比较大

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作者: ashey    时间: 2015-12-3 20:15

惜名 发表于 2015-5-9 08:53
MARK。
各位做过的可以来讨论讨论，没钱的孩子真可怜。。。

你好，我想借楼问一下，是细胞的培养全过程都要用去exosomes的血清吗？

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作者: 惜名    时间: 2015-12-4 09:00

ashey 发表于 2015-12-3 20:15
你好，我想借楼问一下，是细胞的培养全过程都要用去exosomes的血清吗？

不是，你可以在最后24-48小时换无exo血清。

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作者: ashey    时间: 2015-12-4 11:25

惜名 发表于 2015-12-4 09:00
不是，你可以在最后24-48小时换无exo血清。

嗯，谢谢！

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作者: 子非鱼    时间: 2015-12-11 21:24

niceman1987 发表于 2015-12-2 20:22
我们是采用超离，100000g×5h/次×2次，然后0.22um滤器过滤，两次超离后得到的血清中看不到沉淀了，就认为 ...

请教一下：单位没有超速离心机，只过滤可以不？

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作者: niceman1987    时间: 2015-12-26 01:05

子非鱼 发表于 2015-12-11 21:24
请教一下：单位没有超速离心机，只过滤可以不？

只过滤是不可以的

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作者: 子非鱼    时间: 2015-12-29 09:51

niceman1987 发表于 2015-12-26 01:05
只过滤是不可以的

嗯，我现在也知道了，谢谢啊

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