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标题: 关于血清外泌体的提取和鉴定（求使用101bioP101的同行联系） [打印本页]
作者: 木瓜31    时间: 2015-5-25 20:58
标题: 关于血清外泌体的提取和鉴定（求使用101bioP101的同行联系）
做血清外泌体的战友，欢迎一起交流~加QQ 819743295
有刚好用101bio公司的P101提取血清外泌体的盆友吗？我已望眼欲穿！！！跑蛋白电泳虽已鉴定出CD63及TSG101，但位置很贴近，丽春红染色40~70kd附近一大团，像没跑开（如下图），跑了很多次都是这样，不知道是不是试剂中含高盐成分？
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PS: 使用冷门产品，如果遇上售后支持服务不kind，简直就是虐心。。
作者: yy8651    时间: 2015-5-25 22:44
有知道的赶紧交流下，学习了
作者: 惜名    时间: 2015-5-26 08:05
关于售后，不得不赞美一下SBI的唐慧。
声音温柔且不说，关键是技术很专业，搞不定的问题她还可以去问国外技术支持。。。

PS没用过101bio的P101
作者: seallin    时间: 2015-5-26 09:18
洗的次数太少，一看基本都是BSA和TF
作者: 惜名    时间: 2015-5-26 09:44
seallin 发表于 2015-5-26 09:18
洗的次数太少，一看基本都是BSA和TF

什么意思？
用kit提取exo怎么洗呢？
作者: seallin    时间: 2015-5-26 12:39
惜名 发表于 2015-5-26 09:44
什么意思？
用kit提取exo怎么洗呢？

洗完一次，再加入大量PBS，把pellet吹散开，再加入1/2正常量的kit，再提取一次，这样BSA和TF就会少很多，如果样品和kit足够，建议再洗一次，如果是要做蛋白组学实验，三次清洗时起码的
作者: 木瓜31    时间: 2015-5-29 10:02
seallin 发表于 2015-5-26 09:18
洗的次数太少，一看基本都是BSA和TF

谢谢你的意见~ 不过，还是不太明白，我提的是血清外泌体，不会有BSA吧??TF是指转铁蛋白（分子量80kd)，血清中含量有这么高吗？我只知道外泌体中有转铁蛋白受体，分子量84KD,含量会这么高吗？另外就是我用这个kit提到的外泌体就是外泌体重悬液（没有直接看到pellet这步），还是建议再用试剂提一次吗？其实我做核酸（不做蛋白），可能对杂蛋白要求没那么高，但是很困扰为什么这一大团蛋白跑不开？我显得CD63位置在这一团的下缘，Alix和Tsg101条带基本与这一团形状一致。。恳求意见和建议~
作者: 丁倩倩    时间: 2015-5-29 13:25
我显得alix也是这样，不知道对不对
作者: seallin    时间: 2015-5-29 13:50
木瓜31 发表于 2015-5-29 10:02
谢谢你的意见~ 不过，还是不太明白，我提的是血清外泌体，不会有BSA吧??TF是指转铁蛋白（分子量80kd)，血 ...

有可能是洗的次数少，导致溶液中仍然有一些培养液残留，培养液中蛋白浓度是7mg/ml，而你提的那些外泌体顶多才几百微克，稍微残留点培养液，跑胶的时候就全是培养液的蛋白了，你的条带里BSA,TF和IgG的重链都是很有可能的。我超离的时候就是用PBS重新离了两次，最后结果还是有很多血清污染占大头。
作者: wenzhouzsl    时间: 2015-5-29 19:05
我也觉得SBI的唐慧 很不错，很专业，而且遇到新的问题她会及时反馈到国外的技术支持。
赞
作者: 木瓜31    时间: 2015-6-9 14:42
seallin 发表于 2015-5-29 13:50
有可能是洗的次数少，导致溶液中仍然有一些培养液残留，培养液中蛋白浓度是7mg/ml，而你提的那些外泌体顶 ...

我提的不是细胞培养液外泌体，是血清外泌体哦。还有个疑问想要请教：如果是IgG混进外泌体样本中，孵抗体会产生假阳性吗？显影时，CD63条带正常（细条），但是Alix和Tsg101条带就是一大团的样子
作者: seallin    时间: 2015-6-10 14:25
木瓜31 发表于 2015-6-9 14:42
我提的不是细胞培养液外泌体，是血清外泌体哦。还有个疑问想要请教：如果是IgG混进外泌体样本中，孵抗体 ...

血清中这些杂蛋白的浓度只有更高，一大团肯定不正常，肯定是有干扰的，不行你可以试试胶上酶解，看看大团的是什么物质
作者: wanghx_85    时间: 2015-6-11 10:18
吉泰的技术支持，唐慧确实不错，忍不住赞一个，声音温柔，又有耐心，又专业，让我这个科研苦逼孩子心里感到前所未有的温暖啊~
作者: hereissyk    时间: 2015-7-7 16:03
我也用过101的，不行，根本提不出来，现在全部用超离
作者: jp3266726    时间: 2015-7-10 15:21
惜名 发表于 2015-5-26 08:05
关于售后，不得不赞美一下SBI的唐慧。
声音温柔且不说，关键是技术很专业，搞不定的问题她还可以去问国外技 ...

唐慧是哪个代理公司的啊
作者: 惜名    时间: 2015-7-10 16:38
jp3266726 发表于 2015-7-10 15:21
唐慧是哪个代理公司的啊

SBI
作者: guomengzhou    时间: 2015-12-6 21:25
seallin 发表于 2015-5-26 12:39
洗完一次，再加入大量PBS，把pellet吹散开，再加入1/2正常量的kit，再提取一次，这样BSA和TF就会少很多， ...

你好，请问下你的意思是第一次提取完的沉淀用PBS重悬后再加入原来KIT量的1/2再次提取吗？那最后的沉淀会不会比原来少了？谢谢！
作者: nene    时间: 2015-12-7 14:42
SBI 提尿液和提血浆的kit大家都多少钱拿下？50个反应，7千多，有没有搞错？
作者: spencerliu    时间: 2016-3-30 22:58
亲们，我的也有同样的问题，但是我是用的p100，但是25kd的CD9是杂出来的，但是CD63被在70KD左右的很强的杂蛋白覆盖。不知道现在各位战友有没有解决这个问题。
作者: 安馨1993    时间: 2017-4-10 00:02
wenzhouzsl 发表于 2015-5-29 19:05
我也觉得SBI的唐慧 很不错，很专业，而且遇到新的问题她会及时反馈到国外的技术支持。
赞 ...

亲，有没有唐慧的联系方式啊，也遇到一些问题呢，拜托啦
作者: Shimadzu-GL    时间: 2017-4-19 09:02
安馨1993 发表于 2017-4-10 00:02
亲，有没有唐慧的联系方式啊，也遇到一些问题呢，拜托啦

可以直接打他们公司的电话找啊
作者: 安馨1993    时间: 2017-4-19 22:39
Shimadzu-GL 发表于 2017-4-19 09:02
可以直接打他们公司的电话找啊

问代理要了其他吉泰的技术支持，也挺详细细心的，谢谢啦
作者: Shimadzu-GL    时间: 2017-4-20 09:57
安馨1993 发表于 2017-4-19 22:39
问代理要了其他吉泰的技术支持，也挺详细细心的，谢谢啦

您现在用的外泌体提取方法是哪种？



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