外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用

标题: 请问大家有用流式检测exosome的步骤吗？ [打印本页]
作者: 满天心情    时间: 2015-7-3 11:58
标题: 请问大家有用流式检测exosome的步骤吗？
请问大家有用流式检测exosome的步骤吗？可以共享一下吗？谢谢！
作者: Seagull    时间: 2015-7-27 11:31
同求，如何做呢，求大神指教
作者: luckkit    时间: 2015-10-28 14:44
我正在用的，仅供参考

Flow cytometry analysis of exosomes-bound beads
1. Incubate 30 µg of exosomes or 30 µg BSA (negative control) in a 10 µl volume of beads at RT for 15 min with continuous rotation.
2. This suspension was diluted to 1ml with PBS and incubate the mixture at RT for a further 2 h or at 4 ℃ overnight with agitation.
3. Terminate the coupling reaction by the addition of 100 mM glycine and 2% BSA in PBS and left rotating for 30 min at RT.
4. Exosomes-bound beads were washed once in 2% BSA in PBS and centrifuged for 1 min at 14,800g, blocked with 10% BSA with rotation at room temperature for 30 min, washed a second time in 2 % BSA and centrifuged for 1 min at 14,800g, and incubated with anti-X during 30 min rotating at 4 ℃. .
5. Beads were centrifuged for 1 min at 14,800g, the supernatant was discarded and beads were washed in 2% BSA and centrifuged for 1 min at 14,800g.
6. Alexa-488-tagged secondary antibodies (Life Technologies, 3 ml of antibody in 20 ml of 2 % BSA) were used during 30 min with rotation at 4 ℃. Secondary antibody incubation alone was used as control and to gate the beads with X＋-bound exosomes. The percentage of positive beads was calculated relative to the total number of beads analysed per sample (100,000 events). This percentage was therein referred to as the percentage of beads with X＋ exosomes.
作者: Izon    时间: 2015-10-28 15:12
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作者: luckkit    时间: 2015-10-29 13:17
我们的beads是4um的，Thermo家的
作者: weaver    时间: 2015-11-4 09:49
luckkit 发表于 2015-10-28 14:44
我正在用的，仅供参考

Flow cytometry analysis of exosomes-bound beads

能求一份文献出处么？.....
作者: 子非鱼    时间: 2015-12-11 20:28
本帖最后由 子非鱼 于 2016-1-26 14:39 编辑
weaver 发表于 2015-11-4 09:49
能求一份文献出处么？.....

有个类似的：Sonia A. Melo, Linda B. Luecke, Christoph Kahlert et al. Glypican-1 identifies cancer exosomes and detects early pancreatic cancer. nature. doi:10.1038/nature14581.

作者: 子非鱼    时间: 2016-1-26 14:39
luckkit 发表于 2015-10-29 13:17
我们的beads是4um的，Thermo家的

luckkit同学，你已经做过exosome的磁珠分选吗？效果怎么样？必需搭配他们家的抗体吗？我从Abcam买的抗体CD63可用作流式，不知道可不可以用？我看他们家的珠子基本都是15ml包装的，可以分选多少外泌体啊？求分享~~~
作者: 刀客求一    时间: 2016-2-19 11:39
luckkit 发表于 2015-10-29 13:17
我们的beads是4um的，Thermo家的

可以受累告知一下货号吗，新手小白不知怎么选择。不胜感激。
作者: 胖子的心境    时间: 2016-3-21 09:51
真的是头都大了
作者: magae    时间: 2016-6-21 10:16
1. Incubate 30 µg of exosomes or 30 µg BSA (negative control) in a 10 µl volume of beads at RT for 15 min with continuous rotation.

请问下这里exosomes和latex beads是什么原理结合的？
作者: magae    时间: 2016-6-21 10:41
4.Exosomes-bound beads were washed once in 2% BSA in PBS and centrifuged for 1 min at 14,800g

请问这里能用磁力架分磁珠和外泌体吗？不用14800g离心
作者: 程琳    时间: 2016-8-10 09:28
luckkit 发表于 2015-10-28 14:44
我正在用的，仅供参考

Flow cytometry analysis of exosomes-bound beads

请问您买的什么珠子，方便提供一下货号吗？
作者: 程琳    时间: 2016-8-10 09:30
luckkit 发表于 2015-10-29 13:17
我们的beads是4um的，Thermo家的

是这个吗，Aldehyde/Sulfate Latex Beads, 4% w/v, 4 µm。货号： A37304，新手上路，刚想定珠子，请您多多指教
作者: sonja_forever    时间: 2016-8-26 19:48
我是先用BD的标准微球定标，微球直径在0.1um到1.9um不等，用微球圈门之后再将微囊泡与流式抗体孵育后上机检测
作者: 沧浪之水    时间: 2016-9-26 10:23
程琳 发表于 2016-8-10 09:30
是这个吗，Aldehyde/Sulfate Latex Beads, 4% w/v, 4 µm。货号： A37304，新手上路，刚想定珠子，请您多 ...

我订的这个
作者: 沧浪之水    时间: 2016-9-26 10:23
程琳 发表于 2016-8-10 09:30
是这个吗，Aldehyde/Sulfate Latex Beads, 4% w/v, 4 µm。货号： A37304，新手上路，刚想定珠子，请您多 ...

我订的这个
作者: 小七果果8    时间: 2016-10-22 10:38
请问珠子订这个可以吗？CML Latex Beads, 4% w/v, 4 µm   货号 C37253   15 ml Thermo
作者: 小七果果8    时间: 2016-10-22 10:40
前辈~一抗和二抗都是怎么选择的啊？新手求指导~
作者: 小七果果8    时间: 2016-11-4 10:25
沧浪之水 发表于 2016-9-26 10:23
我订的这个

请问你定的这个货号的怎么样？流式的抗体定的哪家的啊？
作者: xlyz    时间: 2019-7-2 19:40
luckkit 发表于 2015-10-29 13:17
我们的beads是4um的，Thermo家的

求克隆号或者货号呀，你用的就是普通流式检测的吗？
作者: xlyz    时间: 2019-7-2 19:42
luckkit 发表于 2015-10-29 13:17
我们的beads是4um的，Thermo家的

求克隆号或者货号呀，你用的就是普通流式检测的吗？
作者: yudan    时间: 2021-8-30 22:38
luckkit 发表于 2015-10-28 14:44
我正在用的，仅供参考

Flow cytometry analysis of exosomes-bound beads

您好，请问可以指教一下圈门方式吗？按文献里的步骤，做出来的阳性率很低，一直找不到原因。



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