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标题: SBI Exo-Quick TC提取血清exo经验与困惑 [打印本页]
作者: 惜名    时间: 2015-7-7 17:03
标题: SBI Exo-Quick TC提取血清exo经验与困惑
SBI的Exo-Quick有两种，一种就是Exo-Quick，说明书提示用以提取血清exo；还有一种是Exo-Quick TC，用以提取培养基或尿液exo。
我在想，培养基不就是10%FBS+DMEM之类的么，那么我如果用PBS（或DMEM、IMDM）稀释血清，制造一种类似培养基的东西，然后用Exo-Quick TC是否可以提取了呢？


抱着试试看的态度，我选择了Exo-Quick TC。
取100ul小鼠血清（分别为sham和心梗小鼠），用400ul PBS稀释，得500ul mix。加入100ul Exo-Quick TC，此时立即出现浑浊（什么情况？）
Anyway，继续做 。4度静置40min左右，1500g*30min离心，见EP管底部有较多白色沉淀。再用200ul PBS重悬吹打，得清亮、透明混合液。


鉴定不打算做了，直接做表征。观察其对靶细胞是否有作用。
欲知后事如何，且听下回分解。

作者: 惜名    时间: 2015-7-8 09:06
Johnny 发表于 2015-7-7 17:10
立即出现浑浊是因为你稀释的血清里面蛋白和盐离子的成分过高。如果将细胞培养上清浓缩高倍数后用Exo-Quick  ...

是因为蛋白和盐过高么，之前我倒不知道这个。
吹打后是可以变成透明的，当然不是那种像纯净水一样的透明，但也不是浑浊。
我之前用Millipore超滤的时候，一般都是10ml超滤至1ml左右，其实这个浓缩程度已经很大了，但加入1/5的Exo-Quick TC，并无立即浑浊，当然，我此前用的都是无血清培养基。。。

这次提取没测浓度，我觉得测浓度没啥意义了，肉眼看到的沉淀太明显了，显然应该有不少其他杂志吧。
因为有设置了sham组和心梗组，所以打算先做做现象看。
作者: 惜名    时间: 2015-7-8 15:01
Johnny 发表于 2015-7-8 13:03
嗯嗯，吹打后能变透明就OK

进展不错O(∩_∩)O哈！

如果不能变透明，说明什么问题呢？
是因为杂质太多么？
作者: vetmeng-exo    时间: 2018-10-19 09:59
Johnny 发表于 2015-7-8 21:03
不能变透明的话，就提不出来了，因为把蛋白全部沉淀了，整个体系一般都是固体 ...

您好，我最近用SBI试剂盒提取外泌体，提取试剂加进去后液体变浑浊，混匀后也不是特别澄清，提取后沉淀都是红色，胶冻状。按照您说的是因为细胞培养上清浓缩倍数太高造成的吗？那一般都多少倍浓缩比较合适呐？我的样品很珍贵，还有补救的办法吗？请赐教，万分感谢。
作者: peggy4598690    时间: 2018-12-10 12:52
想请问最后做出来有成功吗？
作者: ronaldchen    时间: 2019-3-8 17:56
全是杂志，外泌体有，全被99.9%的杂志掩盖了
作者: whulwj2019    时间: 2019-10-28 15:14
后来就没有然后了？
作者: hj978    时间: 2019-11-6 21:52
问一个问题，为什么我看见好多人提取血清外泌体使用Exo-Quick TC，而不是Exo-Quick LP呢
作者: hj978    时间: 2019-11-6 21:55
hj978 发表于 2019-11-6 21:52
问一个问题，为什么我看见好多人提取血清外泌体使用Exo-Quick TC，而不是Exo-Quick LP呢 ...

Exo-Quick LP是专门用来提取血清或血浆的，Exo-Quick TC用来提取尿液等的，为什么血清也会使用Exo-Quick TC，我看见不止一篇是这样用的，Exo-Quick LP使用很麻烦，我也想用Exo-Quick TC提取血清外泌体，但是不知道具体缘由
作者: caoruican    时间: 2020-1-14 17:17
谢谢分享！
作者: 小泌    时间: 2020-3-16 18:33
如果纯度不够 可以用外泌体的专业纯化柱，纯度更高，提取速度更快。欢迎联系Q1813061338
作者: MMM    时间: 2021-1-8 17:36
Johnny 发表于 2015-7-7 17:10
立即出现浑浊是因为你稀释的血清里面蛋白和盐离子的成分过高。如果将细胞培养上清浓缩高倍数后用Exo-Quick  ...

请问 我两倍稀释血清 差速提MVs时，20000g 40min后管壁也是有白色沉淀 一晃就散 单独洗出来吹打可消失 这也是这个原因吗



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