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标题: 请教大家超离第一次后是否会用PBS洗涤外泌体，如何洗涤 [打印本页]

作者: 爱学习 时间: 2018-11-13 21:05
标题: 请教大家超离第一次后是否会用PBS洗涤外泌体，如何洗涤
RT。
有人建议先用大的超离管离，再用小超离管加大离心力，浓缩。

作者: hzangs 时间: 2018-11-13 21:27
加PBS 加满超离管。然后再超离一次。然后弃PBS 底部留一点重悬外泌体

作者: 爱学习 时间: 2018-11-14 20:58

hzangs 发表于 2018-11-13 21:27
加PBS 加满超离管。然后再超离一次。然后弃PBS 底部留一点重悬外泌体

有前辈的建议是，第二次用PBS洗涤的时候应该转移到更小的离心管，加大离心力并且延长离心时间，这样能起到浓缩的作用，不知道您的观点如何？

作者: 爱学习 时间: 2018-11-14 20:59

hzangs 发表于 2018-11-13 21:27
加PBS 加满超离管。然后再超离一次。然后弃PBS 底部留一点重悬外泌体

弃PBS是用倒的还是用吸的呢

作者: hzangs 时间: 2018-11-15 11:46

爱学习发表于 2018-11-14 20:59
弃PBS是用倒的还是用吸的呢

吸。

作者: hzangs 时间: 2018-11-15 11:46

爱学习发表于 2018-11-14 20:58
有前辈的建议是，第二次用PBS洗涤的时候应该转移到更小的离心管，加大离心力并且延长离心时间，这样能起 ...

最好要缩小体积

作者: 爱学习 时间: 2018-11-18 19:34

hzangs 发表于 2018-11-15 11:46
吸。

发现一个很震惊的结果，PBS洗之前的重悬的东西，BCA测浓度稀释了五倍还是超过上限500ug/ul，但是PBS洗了之后重悬，测出来浓度不到50ug/ul.所以那么高的浓度，其实都是蛋白杂质喽？

作者: 小柠檬 时间: 2019-3-6 10:41

hzangs 发表于 2018-11-13 21:27
加PBS 加满超离管。然后再超离一次。然后弃PBS 底部留一点重悬外泌体

您好，请问再一次超离的离心力和时间是多少？

作者: hzangs 时间: 2019-3-6 17:42

爱学习发表于 2018-11-18 19:34
发现一个很震惊的结果，PBS洗之前的重悬的东西，BCA测浓度稀释了五倍还是超过上限500ug/ul，但是PBS洗了 ...

对

作者: hzangs 时间: 2019-3-6 17:42

小柠檬发表于 2019-3-6 10:41
您好，请问再一次超离的离心力和时间是多少？

110000g 70min

作者: bokelu 时间: 2019-3-19 09:40

爱学习发表于 2018-11-18 19:34
发现一个很震惊的结果，PBS洗之前的重悬的东西，BCA测浓度稀释了五倍还是超过上限500ug/ul，但是PBS洗了 ...

没错，我也发现了这个问题，最后一次离心之前上清中的蛋白浓度很高。

作者: HYZ123456 时间: 2019-9-16 15:53

爱学习发表于 2018-11-18 19:34
发现一个很震惊的结果，PBS洗之前的重悬的东西，BCA测浓度稀释了五倍还是超过上限500ug/ul，但是PBS洗了 ...

你好，我现在也出现你这样的情况了，最后测出蛋白浓度高达50 ug/ul, 想请问一下你，是如何解决这个问题的？
希望能帮我解答一下，非常感谢~

作者: 君不知 时间: 2020-10-25 16:05
想问一下大家第二次超离前用PBS清洗时加多少PBS？是继续用和上清差不多（几十毫升）的PBS清洗后超离，还是换成几毫升的小管子用台式机超离？

作者: WinterBlinder 时间: 2021-5-16 21:07
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