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标题: elisa定量蛋白检测血清exosome的含量多少？ [打印本页]
作者: 大琳宝儿    时间: 2015-7-22 10:33
标题: elisa定量蛋白检测血清exosome的含量多少？
本帖最后由 大琳宝儿 于 2015-7-22 16:00 编辑

我可不可以利用elisa方法检测血清中的exosome的标志蛋白来试图定量血清中exosome的含量？ 或者提取血清总蛋白，跑western看标志蛋白的多少来定量血清里exosome多少 麻烦大家给点意见 嘿嘿
作者: hereissyk    时间: 2015-7-23 00:07
我觉得难点反而在于如何确保把血清中的exo都提出来，先保证完整的提，下一步才是测定含量，含量用蛋白定量就要考虑到纯度的问题，单用某个标志蛋白又会有亚群的问题。。。真烦
作者: 大琳宝儿    时间: 2015-7-23 07:51
hereissyk 发表于 2015-7-23 00:07
我觉得难点反而在于如何确保把血清中的exo都提出来，先保证完整的提，下一步才是测定含量，含量用蛋白定量 ...

不先提取出exo 直接在血清里检测应该就不会出现这样的问题 但其实我有两点不是很很清楚 1：exo的标志蛋白占总血清蛋白的比例会不会太太少而不好检测（起码western不容易）2：像CD63 81 9等等这些标志蛋白真的只在exo上面有吗？ 我也觉得挺烦的 嘿嘿
作者: hereissyk    时间: 2015-7-23 16:07
直接检测如何排除其他囊泡？标志蛋白如CD63比例不会小，但是没有特异性，各种细胞的exo都会有CD63表达。
作者: 惜名    时间: 2015-7-23 17:30
我觉得可以试试啊，楼主在文献里看到过这种方法么？
作者: yy8651    时间: 2015-7-24 09:47
感觉还是要提出来测吧
作者: 大琳宝儿    时间: 2015-7-24 10:06
惜名 发表于 2015-7-23 17:30
我觉得可以试试啊，楼主在文献里看到过这种方法么？

没看到过，一般文献不用western定量啊 但我想定量看看
作者: 大琳宝儿    时间: 2015-7-24 10:09
hereissyk 发表于 2015-7-23 16:07
直接检测如何排除其他囊泡？标志蛋白如CD63比例不会小，但是没有特异性，各种细胞的exo都会有CD63表达。 ...

只要是囊泡结构上都有CD63吗？还是只exosome上有 ？这方面感觉了解的少啊 再查查得我~
作者: 大琳宝儿    时间: 2015-7-24 10:12
yy8651 发表于 2015-7-24 09:47
感觉还是要提出来测吧

如果踢出来检测的话会有些怀疑 exosome提的彻不彻底 有没有损失 如果western的话定量需要内参啊 没有合适内参也是问题 嘿嘿
作者: 大琳宝儿    时间: 2015-7-24 10:15
hereissyk 发表于 2015-7-23 00:07
我觉得难点反而在于如何确保把血清中的exo都提出来，先保证完整的提，下一步才是测定含量，含量用蛋白定量 ...

同意，所以感觉如果有elisa检测会好点？
作者: hereissyk    时间: 2015-7-24 22:26
大琳宝儿 发表于 2015-7-24 10:09
只要是囊泡结构上都有CD63吗？还是只exosome上有 ？这方面感觉了解的少啊 再查查得我~ ...

我看到的是只有exosome有，但无法区分exo的来源细胞



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