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标题: 【新文速递】exo不同提取方法的比较 [打印本页]

作者: 惜名 时间: 2015-7-23 10:28
标题: 【新文速递】exo不同提取方法的比较
作者采用了密度梯度离心、超离、超滤、ExoQuick、Exo-spin、qEV等手段分离exo。然后做各种检测，一些主要结果如下：
密度梯度离心可以得到最纯的exo，但是得率很低。超滤比较好，可以比较好的替代密度梯度离心。

重点是三个kit：ExoQuick的优点在于得到的颗粒大小比较好，大多数在<100nm，而后二者得到了较多>200nm的颗粒。
但ExoQuick有显著的缺点：蛋白污染。
作者通过加样等质量exo蛋白进行跑western的exo marker，发现ExoQuick的条带最弱，Exospin次之，qEV和密度梯度最好。因此作者推测，ExoQuick提取的exo中有其他蛋白的污染。

在讨论中，作者又对结果进行了系统的解释，最后表示：用蛋白定量的方法评估exo是不准哒。。。用Calnexin（一个只在细胞表达的蛋白）评价exo纯度也是不够充分哒。。。

作者: niceman1987 时间: 2015-7-23 22:27
好，学习了

作者: itooth 时间: 2015-7-24 00:16

版主辛苦了！

作者: CAAS 时间: 2015-7-24 13:49
感谢分享！

作者: kadak007 时间: 2015-7-26 21:24
感谢分享

作者: mirexosome 时间: 2015-7-28 17:33
楼主，能不能用试剂盒提取EXOSOME，然后用它作用于另一种活细胞

作者: 惜名 时间: 2015-7-29 08:16

mirexosome 发表于 2015-7-28 17:33
楼主，能不能用试剂盒提取EXOSOME，然后用它作用于另一种活细胞

当然可以的，当然可以，当然可以。
否则试剂盒公司早就破产了，否则试剂盒公司早就破产了，否则试剂盒公司早就破产了。
重要的事情说三遍。。。

作者: mirexosome 时间: 2015-7-29 08:41

惜名发表于 2015-7-29 08:16
当然可以的，当然可以，当然可以。
否则试剂盒公司早就破产了，否则试剂盒公司早就破产了，否则试剂盒公 ...

提取的试剂盒里面内不会有什么有害的试剂吧,因为我看到的大多数文章是用超离心法提取然后作用于活细胞,所以我不确定能否用试剂盒提

作者: 惜名 时间: 2015-7-29 10:49

mirexosome 发表于 2015-7-29 08:41
提取的试剂盒里面内不会有什么有害的试剂吧,因为我看到的大多数文章是用超离心法提取然后作用于活细胞,所 ...

这个确实需要考虑，SBI法离心的时候有2步，残余液体去除还是比较干净的。另外设立对照组也可以知道是否会对细胞有影响。

作者: frankchan168 时间: 2015-7-29 16:53
谢谢分享

作者: Damon 时间: 2015-7-30 17:28
有没有人用过101bio的pureEXO提取，我怎么感觉我提的浓度很低，测蛋白浓度都测不出来啊

作者: hereissyk 时间: 2015-7-31 15:06

Damon 发表于 2015-7-30 17:28
有没有人用过101bio的pureEXO提取，我怎么感觉我提的浓度很低，测蛋白浓度都测不出来啊 ...

有，将近4k大洋买了，用了三次，分别用了三种方法测试都没有结果，已经在吃灰。

作者: Damon 时间: 2015-8-1 23:12

hereissyk 发表于 2015-7-31 15:06
有，将近4k大洋买了，用了三次，分别用了三种方法测试都没有结果，已经在吃灰。 ...

我提的感觉也不咋地，测得浓度很低，几乎就没有，这可咋整啊，钱都花了

作者: coco 时间: 2015-8-4 17:28
请问有没有试过用免疫沉降和中和沉降的方法来进行外泌体的提取呢?

作者: 虚实高低 时间: 2015-8-14 10:25

惜名发表于 2015-7-29 10:49
这个确实需要考虑，SBI法离心的时候有2步，残余液体去除还是比较干净的。另外设立对照组也可以知道是否会 ...

如何设对照啊，版主？

作者: 惜名 时间: 2015-8-14 17:48

虚实高低发表于 2015-8-14 10:25
如何设对照啊，版主？

如何设对照。。。
A、你取正常培养基，直接加exo-quick，按照protocol提取“exo”，最后重悬，然后干预细胞；
B、你在养A细胞，以B刺激干预A细胞，然后收集A细胞分泌的exo。对照就设无B刺激的A细胞分泌的exo

作者: xianxian 时间: 2015-8-19 21:43

Damon 发表于 2015-7-30 17:28
有没有人用过101bio的pureEXO提取，我怎么感觉我提的浓度很低，测蛋白浓度都测不出来啊 ...

我也用101bio提的，效果也不好。你现在用什么提的呢？

作者: shuiyuan0519 时间: 2015-8-20 09:35
我用过SBI,还不错。

作者: 花如烟12321 时间: 2015-11-18 18:37
楼主，有没有蔗糖梯度及凝胶层析中文版的步骤哇？实验小菜，翻译的好生硬

作者: zhangtao1012450 时间: 2015-11-23 20:12
非常好的文章，对我们初学者有很好的帮助，非常感谢楼主的分享，先学习了，谢谢

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