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标题: 小白请问10万g第一次离心后，吸上清该怎么操作？ [打印本页]
作者: 出尘7    时间: 2019-5-11 17:18
标题: 小白请问10万g第一次离心后，吸上清该怎么操作？
小白请问10万g第一次离心后，吸上清该怎么操作？还望各位大神指教一下！

论坛里大佬都说用吸，所以我上次超离之后，选择用1ml的枪头吸上清，吸到最后的时候小心翼翼但是还是感觉把外泌体吸走了，这次做wb并没有做出来，感觉不如一次性倒处理的好。现在特别想问问大家这个吸的操作到底怎么进行，使用1ml的枪吸还是用10ml的移液管吸？我的离心管大小是38.5ml的。底部该留多少液体呢??1ml还是200ul？求大神解答！
作者: 出尘7    时间: 2019-5-11 18:02
坐等大神回答
作者: hzangs    时间: 2019-5-12 16:51
出尘7 发表于 2019-5-11 18:02
坐等大神回答

建议大家是从上面吸。但是如果你倒  也可以做出来。 那就没必要必须从上面吸啦
作者: 出尘7    时间: 2019-5-13 14:06
hzangs 发表于 2019-5-12 16:51
建议大家是从上面吸。但是如果你倒  也可以做出来。 那就没必要必须从上面吸啦 ...

大神，是用1ml的枪吸还是用10ml的移液管吸？感觉大枪的吸力比倒的吸力还大。。。
作者: exo-wang    时间: 2019-5-22 16:19
hzangs 发表于 2019-5-12 16:51
建议大家是从上面吸。但是如果你倒  也可以做出来。 那就没必要必须从上面吸啦 ...

请大神指教，离心3小时会不会太久，上次离心了3小时沉淀倒是很多，但是不能完全溶于PBS，蛋白浓度低，颗粒浓度不高，CD63的western条带也很弱，但是沉淀的条带里CD63比较强，请问你遇到过沉淀不溶的情况吗？有什么处理方法不？
作者: hzangs    时间: 2019-5-22 19:08
exo-wang 发表于 2019-5-22 16:19
请大神指教，离心3小时会不会太久，上次离心了3小时沉淀倒是很多，但是不能完全溶于PBS，蛋白浓度低，颗 ...

如果你是正常的培养液体系， 基本上10万g  70min 就够了。  如果沉淀不容 可能是离心下来了一些杂质。  降低时间
作者: exo-wang    时间: 2019-5-23 14:27
hzangs 发表于 2019-5-22 19:08
如果你是正常的培养液体系， 基本上10万g  70min 就够了。  如果沉淀不容 可能是离心下来了一些杂质。   ...

好的，我再做一下看，谢谢大神
作者: 425612liyuan    时间: 2019-7-18 13:17
请问有BCA法测外泌体的步骤吗
作者: zhangchao    时间: 2020-7-19 23:03
425612liyuan 发表于 2019-7-18 13:17
请问有BCA法测外泌体的步骤吗

请问你有BCA测外泌体的具体步骤了么？
作者: 奥之    时间: 2020-7-28 09:58
请问贝克曼超离机10万g对应多少rpm?
作者: longw    时间: 2021-5-16 23:43
hzangs 发表于 2019-5-12 16:51
建议大家是从上面吸。但是如果你倒  也可以做出来。 那就没必要必须从上面吸啦 ...

版主大大，我提取的间充质干细胞的外泌体，将近500ml提到大约600ug外泌体，不过超离后是直接倒掉的，会不会有损失呀。。。
作者: hzangs    时间: 2021-5-17 14:19
longw 发表于 2021-5-16 23:43
版主大大，我提取的间充质干细胞的外泌体，将近500ml提到大约600ug外泌体，不过超离后是直接倒掉的，会不 ...

超离肯定就会有损失的。这个没办法。 直接倒  肯定会损失一些。
作者: longw    时间: 2021-5-18 22:52
hzangs 发表于 2021-5-17 14:19
超离肯定就会有损失的。这个没办法。 直接倒  肯定会损失一些。

谢谢大神回复，您觉得我这个量算是正常吗还是很少(500ml得到大约600ug外泌体)
作者: onr    时间: 2021-6-29 16:26
hzangs 发表于 2021-5-17 14:19
超离肯定就会有损失的。这个没办法。 直接倒  肯定会损失一些。

老师请问，吸的话，是用1ml枪从上往下吸吗？这样会不会因为吸力带走一部分外泌体，谢谢？外泌体在管壁底部粘附紧密吗？



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