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标题: 十年磨一剑,终于做完啦!!--投稿全记录 [打印本页]

作者: 惜名    时间: 2015-9-6 12:45
标题: 十年磨一剑,终于做完啦!!--投稿全记录
好吧,我承认我是标题党。。。
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鄙人实验室有2个人主要做exo,一个是师兄(其实和我一届,但年龄比我大很多),一个是我。
师兄平时要上临床,因此很忙,做的是DC-exo-Cardiomyocytes,未涉及很多机制,匆匆做了点现象,就投稿了。
被拒了。。。
其中一条拒稿意见是这样的:
The method of exosome isolation - ExoQuick is a well accepted method of exosome isolation. The yield is high, but the specificity is low. This paper (Lobb RJ Optimized exosome isolation protocol for cell culture supernatant and human plasma, J Extra Vesc, 2015) nicely sums up the problem: "In conclusion, both ExoQuickTM and Exo-spinTM have significantly more non-exosomal protein contamination as evidenced by the particle/protein ratio combined with increased exosome marker expression in qEV and density gradient isolations."  This is borne out by your suspiciously high yield of protein from exosomes 10+ ug.  Therefore, a number of non-exosomes may also be present in the tail-vein injections resulting in signaling from these activated dendritic cells.  I encourage you to make note of this methodologic limitation in your conclusion.
用kit的童鞋们,都要小心啦。。。
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鄙人也基本做完了,正在整理数据写文章。
本着21世纪的“互联网分享精神”,打算在下次小聚时与大家分享我所有的结果。

OK,你们终于发现了,这其实是一个广告贴!!!
欢迎来参加“魔都外泌体论坛第三次线下聚会”
时间初步定于十一之后的第一个周末,地点在上海·二军大。

作者: wooway    时间: 2015-9-6 16:09
这样麻烦就大了。。。我这都是在用KIT做。。。。。。
作者: wooway    时间: 2015-9-6 16:10
然后的确用KIT提取的外泌体然后提的蛋白浓度很高。。。。怀疑就是这个原因。。
作者: yy8651    时间: 2015-9-6 20:31
哎呀呀,投的哪个杂志啊?意思就是kit不行呗?
作者: yy8651    时间: 2015-9-6 20:33
分享结果,看来版主真的都做完了。好好哟!
作者: 惜名    时间: 2015-9-7 08:30
yy8651 发表于 2015-9-6 20:31
哎呀呀,投的哪个杂志啊?意思就是kit不行呗?

投的JMCC
作者: hereissyk    时间: 2015-9-8 09:21
幸苦我买的两个试剂盒都不好用逼我一直用超离。。。
作者: chyi    时间: 2015-9-8 10:23
冲标题来的。。。
作者: seallin    时间: 2015-9-14 13:56
其实我的提取方法也是破解了商品化的方法,我担心我也会被同样的意见拒搞~~~~
作者: seallin    时间: 2015-9-14 14:20
我仔细看了你同学的那个审稿意见和原文,发现了一个被忽视的地方,如果能抓住这个漏洞,我想能很好的说服审稿人。我们知道,做超速离心的时候,最后会用PBS冲洗一遍,这样就除去了大多数的蛋白。而商品化的kit提取之后,很难再用PBS冲洗一遍,不然就会散掉。打个比方,超速离心90%是exosome蛋白,而商品化kit由于没有反复清洗,可能很多还是牛血清的蛋白。这个原因才导致了原文中为什么横向对比WB实验中,商品化kit效果不如离心的原因。其实用商品化kit的时候也是可以洗的,当然这需要操作者的经验,如果能好好的洗干净血清,WB的结果还是很不错的。这不能说明kit的效果不佳,只是我们的后续操作不够到位。
作者: Nichole0503    时间: 2015-9-25 17:09
不在魔都的咋办?求帮助




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