外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用

标题: EVs分离纯化后怎么保存？快参考这篇文献！ [打印本页]
作者: Johnny    时间: 2021-1-30 07:55
标题: EVs分离纯化后怎么保存？快参考这篇文献！
EVs分离纯化后怎么保存？快参考这篇文献！

细胞外囊泡（EVs）涉及广泛的生理和病理过程，在过去的几十年中进行了广泛的研究。自1990年代末和2000年代初开始迅速开展与EVs相关的研究以来，为开发EVs的分离、表征、处理等方面的适当和标准化方法做出了许多努力。尽管在这一领域取得了长足的进步，EVs的一些重要方面仍未得到很好的理解。一种情况是在高于0°C的温度（即不冻结）下存储或处理EVs溶液。
关于将EVs长期存放几天至几个月的适当条件的共识是冷冻在-80°C或更低的温度下。从几个小时到几天的短期存储通常是在放置于+ 4°C的温度下，有些论文报告说是这样做的。这些存储条件在实验室实践中很常见，这很可能是由于EVs具有极高的稳定性的普遍观点以及在反复冷冻/融化循环期间EVs性能下降。除了储存外，许多实验步骤还要求将含EV的溶液在+4°C下孵育几个小时，例如，EV与beads的特异性结合、细胞对EV的吸收等。

有几项研究专门针对EVs在+4°C或室温下的稳定性进行了研究。可以在研究论文中找到更多信息，在这些论文中，按照通用主题对EVs的稳定性进行了检查。之前的研究结论具有高度异质性，因为它既包含定量结果又包含半定量结果，以及定性观察结果，这些观察结果具有不同的EV参数作为稳定性指标。同样，这些数据可能会产生偏差，因为用不稳定的EVs获得的结果不太可能被公布。但是，可以根据这些数据提出以下模式。（1）EVs在复杂的液体中（血液或血清、尿液、唾液）较为稳定，可在+4°C、甚至某些情况下+25°C储存。（2）纯化的EVs在+4°C下储存时可能不稳定，会出现颗粒浓度降低、特定标记物水平降低、粒度分布（particlesize distribution，PSD）改变。

各种protocols中的建议也有所不同。在分离EVs之前，预先处理的卵巢卵泡液可能会在+4°C下保存长达一周。纯化后的EVs在+ 4°C下最多可存储48-72小时，同时建议将分离的EVs在冰上保存并按以下步骤尽快处理。这种模棱两可表明需要仔细研究+4°C下的EV不稳定现象。

有几个不同的过程可能是纯化的EVs在+4°C下随时间推移而逐渐降解的原因（如下图）：
文献中提出的在+4˚C储存期间EVs损失/降解的假想过程


如果初始EVs的浓度不同，存储中也表现出不同的行为。标记分子降解而颗粒数量不变的过程与颗粒浓度无关。其余三个机制导致浓度随时间降低。囊泡分解成较小碎片时的相对损失应与初始浓度无关，因为每个囊泡都会自行分解。另一方面，聚集/融合的早期是两个颗粒之间的过程，因此任何给定时间的相对损耗都应随着初始浓度的增加而增加。EVs在试管表面的吸附行为不同。如果浓度很高并且物质的总量远大于表面结合能力，则几乎不会发生相对损失。如果浓度足够低，那么与表面结合能力相比，物质的总量就很低，溶液中的所有物质最终都会丢失。

因此，该研究旨在调查EVs溶液在+4°C下短期存储期间发生的变化，以进一步了解EV损失的潜在机制。

HT-29条件培养基中分离的囊泡的表征

在+4°C下短期保存细胞外囊泡（EVs）溶液是一种常见的做法，但是尚不完全了解此过程中EVs的稳定性。使用纳米粒子跟踪分析发现，从HT-29细胞的条件培养基中分离出的EVs在PBS中储存在普通聚丙烯管中的浓度在（0.5–2.1）×10[size=0.625em]10粒子/mL范围内时，浓度会明显降低。在+4°C下储存48小时，在2毫升Eppendorf管中，0.5毫升EV的EV损失达到51±3％。观察到的损失的约2/3归因于囊泡吸附到管壁上。该结果表明，在纯EVs的浓度低于2×10[size=0.625em]10颗粒/ mL时在+ 4°C条件下容易发生吸附损失。通过使用Eppendorf Protein LoBind管或表面被牛血清白蛋白或EV封闭的普通管，在48小时内总颗粒损失可降低至18-21％。作为条件培养基的模型，在100 000 g离心后，溶解在上清液中的分离的EV损失降低到15％。另外，对于EVs，其扩散控制吸附的一个以前未知的特征被揭示。除了减少颗粒数量外，此过程还会导致较小颗粒的大量损失。

在+4°C下将分离的EVs储存在PBS（0.5 ml）中，颗粒浓度和平均大小的变化

测得的吸附动力学与数值模拟的比较

在+4˚C下储存48 h，不同类型/处理的试管中的EVs总浓度损失的比较

参考文献：Evtushenko EG, Bagrov DV, Lazarev VN, Livshits MA,Khomyakova E. Adsorption of extracellular vesicles onto the tube walls duringstorage in solution. PLoS One. 2020 Dec 28;15(12):e0243738. PMID: 33370319.
附件已隐藏，回复该贴可查看附件  


作者: daryl1996    时间: 2021-1-30 13:20
1111111111111
作者: 努力的小郗    时间: 2021-2-15 17:30
谢谢分享
作者: 碧根果干    时间: 2021-2-16 09:53
谢谢分享
作者: 我是谁    时间: 2021-3-8 08:30
感谢分享
作者: gywfind    时间: 2021-3-11 16:39
有几项研究专门针对EVs在+4°C或室温下的稳定性进行了研究。可以在研究论文中找到更多信息，在这些论文中，按照通用主题对EVs的稳定性进行了检查。之前的研究结论具有高度异质性，因为它既包含定量结果又包含半定量结果，以及定性观察结果，这些观察结果具有不同的EV参数作为稳定性指标。同样，这些数据可能会产生偏差，因为用不稳定的EVs获得的结果不太可能被公布。







福彩双色球
澳洲幸运20
幸运飞艇
作者: lidong    时间: 2021-5-5 17:47
谢谢分享！
作者: nineball    时间: 2021-5-10 12:28
感谢分享
作者: lusankya    时间: 2021-7-21 10:44
感谢版主分享！
作者: travelingbird4    时间: 2021-7-21 16:35
谢谢分享知识
作者: zachary123456    时间: 2021-8-14 15:24
谢谢分享，好好学习
作者: zj121960    时间: 2021-8-23 14:22
xiexxiefenxiag
作者: joycehu1120    时间: 2021-8-24 10:32
谢谢分享，学习到很多
作者: 背后有狮子    时间: 2021-10-14 10:44
谢谢分享
作者: yangjia9505    时间: 2022-2-11 15:05
1111111111111
作者: oldlu98    时间: 2022-2-12 20:12
谢谢l大神分享1111
作者: xing    时间: 2022-2-18 10:45
感谢分享
作者: gywfind    时间: 2022-2-28 13:51
每一个努力的人都能在岁月中破茧成蝶,你要相信,有一天你将破
蛹而出,成长得比人们期待的还要美丽,但这个过程会很痛,会很辛
苦,有时候还会觉得灰心。面对着汹涌而来的现实,觉得自己渺小无
力,但这也是生命的一部分。做好现在你能做的,然后,一切都会好
起来。
幸运飞艇、福彩双色球、幸运时时彩
作者: 甘宁1234    时间: 2022-3-24 16:49
欢迎加入外泌体分享群[attach]5510[/attach]
作者: yujunzhang    时间: 2022-3-29 11:48
感谢分享~
作者: guochun2018    时间: 2022-3-31 14:36
感谢分享
作者: skyees    时间: 2022-7-9 16:53
甘宁1234 发表于 2022-3-24 16:49
欢迎加入外泌体分享群

二维码过期了，可以再分享一个吗
作者: njbaoxi    时间: 2022-7-11 14:48
看看怎么储存
作者: 赵静    时间: 2022-7-11 21:17
谢谢分享
作者: 13031107690    时间: 2022-7-19 15:04
学习一下
作者: #bestie#    时间: 2022-12-6 21:19
谢谢谢谢
作者: Wphil    时间: 2022-12-8 09:07
超实用，赞赞赞。
作者: watchen    时间: 2022-12-27 11:25
学习一下
作者: xll6426324    时间: 2023-1-3 17:55
感谢分享！！
作者: 赵静    时间: 2023-2-4 21:41
谢谢分享
作者: mikemono    时间: 2024-11-10 00:35
thanks very much
作者: Fruit    时间: 4 天前
11111111111



欢迎光临 外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用 (http://exosome.com.cn/) Powered by Discuz! X3.3