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标题: exosome提取RNA的方法 [打印本页]
作者: 怒放的生命    时间: 2014-10-31 14:19
标题: exosome提取RNA的方法
大家都是用什么方法提exo的RNA呢？用普通的trizol法是否可行？我试过2次，貌似浓度都很低
作者: lwj7853    时间: 2014-11-2 19:28
Johnny 发表于 2014-11-1 11:47
trizol法完全可行的。参见最新的那篇cell文章

版主，您说的那篇cell文章是指哪篇？
作者: 快乐小母猪    时间: 2014-11-2 23:05
我都用Trizol提两次了，没提出来
作者: lwj7853    时间: 2014-11-3 17:46
Johnny 发表于 2014-11-3 13:01
Boelens, M. C., et al. (2014). "Exosome Transfer from Stromal to Breast Cancer Cells Regulates The ...

谢谢版主
作者: lwj7853    时间: 2014-11-3 17:53
Johnny 发表于 2014-11-3 13:01
Boelens, M. C., et al. (2014). "Exosome Transfer from Stromal to Breast Cancer Cells Regulates The ...

版主我刚找了找，发现下不了，只能看见摘要，版主您那儿能下吗？可以发我一份吗？跪谢！！！
作者: lwj7853    时间: 2014-11-4 11:02
Johnny 发表于 2014-11-3 19:45
邮箱给我。。

版主太好~\(≧▽≦)/~啦~~~我收到了，正在研究中
作者: 怒放的生命    时间: 2014-11-4 14:41
Johnny 发表于 2014-11-1 11:47
trizol法完全可行的。参见最新的那篇cell文章

哦，那是我提的exo量太少了？看有的文献里是用Qiagen 的 miRNeasyMicro kit。不知道用这种kit提出来会否效率高点。版主你是用什么方法呢？
作者: 怒放的生命    时间: 2014-11-5 15:26
Johnny 发表于 2014-11-5 09:59
我用的Trizol的方法，exosome里的RNA量确实很少，1mL上清大概只能得到10ng左右的exoRNA ...

谢谢！我再试试
作者: 木瓜31    时间: 2014-11-5 15:31
Johnny 发表于 2014-11-5 09:59
我用的Trizol的方法，exosome里的RNA量确实很少，1mL上清大概只能得到10ng左右的exoRNA ...

请问用trizol法提RNA，exosome-PBS重悬液和trizol的体积按怎样的比例？
作者: 木瓜31    时间: 2014-11-6 10:05
Johnny 发表于 2014-11-6 09:48
最好是将trizol直接加到超速离心或者试剂盒得到的exosome pellet中。加到exosome-PBS中会影响trizol的效 ...

我用的是101bio的kit，终产物是exosome-PBS混液啊。。。请问，那如果是加到exosome pellet，要加多少trizol呢?
作者: 木瓜31    时间: 2014-11-6 19:50
Johnny 发表于 2014-11-6 10:10
这样。。。。。。exosome pellet的话，加0.5或1mL就好

谢谢~如果把混液当做液体样本，也许可加trizol LS试试。另外还想请教一个问题，PCR时exosomal miRNA的内参应该选择什么？和一般miRNA内参一样吗？
作者: 惜名    时间: 2014-11-9 09:27
Johnny 发表于 2014-11-7 15:07
exosomal miRNA一般是实验组和对照组相互比较，内参的选择肯定和细胞miRNA不一样。看了写文献，貌似没有 ...

版主真是知心姐姐啊  赞一个  哈啊哈
作者: langlang007jj    时间: 2014-11-9 21:36
版主您好，我也想要一份上面的文章学习下。邮箱langlang007jj@163.com，版主辛苦啦~非常感谢！
作者: 惜名    时间: 2014-11-17 10:21
木瓜31 发表于 2014-11-6 19:50
谢谢~如果把混液当做液体样本，也许可加trizol LS试试。另外还想请教一个问题，PCR时exosomal miRNA的内 ...

前段时间我咨询过101bio的技术人员，他建议使用几种内参（但具体我忘记了，QQ的信息保存功能真是太差劲了，再也没法爱），可以再次咨询一下他~此人常在我们论坛里晃悠的~ 另外，Johnny说的“试验组和对照组比较”，这个也需要内参的吧，好纠结的问题。。。
作者: 惜名    时间: 2014-11-17 15:55
Johnny 发表于 2014-11-17 11:12
嗯，实验组exosome和对照组exosome之间需要内参的，只是目前没见paper报道exosome组成型表达的miRNA成分 ...

对啊  有没有exo组成性表达的miRNA呢，这样就可以作为内参了。好纠结，只能怪我自己文献看的少。。。
作者: 木瓜31    时间: 2014-11-17 20:36
惜名 发表于 2014-11-17 10:21
前段时间我咨询过101bio的技术人员，他建议使用几种内参（但具体我忘记了，QQ的信息保存功能真是太差劲了 ...

我也问过他们这个问题，建议“cel-miR-39-3p,SNORD61 ,SNORD68,SNORD72”这几个内参，不过还得视exosome来源而定。
作者: fjzmx    时间: 2014-11-19 16:07
楼主，我也要那篇cell的文章，求发zhangmx@sysucc.org.cn,感谢！
作者: fjzmx    时间: 2014-11-19 16:20
感谢楼主
作者: huan1989111007    时间: 2014-12-28 10:25
不错，学习了很多，有相关用SBI提exosome的经验么？



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