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标题: 关于超速离心的方法 [打印本页]
作者: onlyrush    时间: 2015-10-28 11:08
标题: 关于超速离心的方法
本帖最后由 onlyrush 于 2015-10-28 11:13 编辑

请问大家用超速离心纯化exosomes是完全按照“Isolation and Characterization of Exosomes from Cell Culture Supernatants and Biological Fluids“来的还是有所优化？
如果有优化的话是在那些方面？增加离心时间？加大离心力？
还有在离心过程中有否加入0.22um过滤这一步骤？是在什么时候加的？
或者是其他的更好的更被认可的方法？
谢谢。附流程图：

作者: focusatbiology    时间: 2015-10-28 11:26
貌似大家都是参考这篇文章的
作者: onlyrush    时间: 2015-10-28 11:42
如果大家在超离这种方法上能够统一的话，那结果应该会有更好的横向可比性吧
希望大家能分享各自的方法，讨论得到统一的结果。
作者: kasangzc    时间: 2015-10-28 12:55
还想请教一下 超滤步骤应该加到哪里？
作者: luckkit    时间: 2015-10-28 14:08
我们一般在2000g*10min后10000g*30min之前进行0.22um过滤。
作者: onlyrush    时间: 2015-10-28 17:05
本帖最后由 onlyrush 于 2015-10-29 09:28 编辑
luckkit 发表于 2015-10-28 14:08
我们一般在2000g*10min后10000g*30min之前进行0.22um过滤。

0.22um过滤是去除细胞碎片残余，是否会损伤exosomes？
过滤和不过滤的效果有否比较过？
作者: 熊胖    时间: 2015-10-28 18:10
我用的是GPC1+exo胰腺癌那篇文献的超离方法 800g和2000g后0.22um过滤，没有1wg离心，直接10w g 2h 两次
作者: 丝瓜    时间: 2015-10-28 18:33
其实0.22 过滤的效果就是10000g离心的一样的，如果两个步骤都有的话，损耗量就比较大了。关键是GPC1那篇文章后面的exo纯化是只用来做了流式么，之前质谱就是用超高速的么，怎么看文章都没讲清楚~~
作者: spencerliu    时间: 2016-3-30 21:27
丝瓜 发表于 2015-10-28 18:33
其实0.22 过滤的效果就是10000g离心的一样的，如果两个步骤都有的话，损耗量就比较大了。关键是GPC1那篇文 ...

但是外泌体本身直径很小，用0.22um的话，应该损耗比离心要低吧，理论上外体可以穿过0.22um的膜啊
作者: spencerliu    时间: 2016-3-30 21:27
丝瓜 发表于 2015-10-28 18:33
其实0.22 过滤的效果就是10000g离心的一样的，如果两个步骤都有的话，损耗量就比较大了。关键是GPC1那篇文 ...

但是外泌体本身直径很小，用0.22um的话，应该损耗比离心要低吧，理论上外体可以穿过0.22um的膜啊
作者: 北燕南飞    时间: 2016-12-16 09:12
我用这个方法超离的，最后得到白色沉淀，而不是大家所说的透明的胶状沉淀，楼主得到的外泌体沉淀是什么样的呀？
作者: xiaodoudou    时间: 2016-12-27 09:04
spencerliu 发表于 2016-3-30 21:27
但是外泌体本身直径很小，用0.22um的话，应该损耗比离心要低吧，理论上外体可以穿过0.22um的膜啊 ...

我也是这么觉的，而且是10000g离完心以后我都滤膜过滤一下。



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