外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用

标题: 有人使用过qiage的exoEasy Maxi Kit吗？ [打印本页]
作者: 张宏道    时间: 2015-10-28 12:02
标题: 有人使用过qiage的exoEasy Maxi Kit吗？
新人求问，
作者: 咏咩咩    时间: 2015-10-28 21:43
同问.!!之前问过技术支持.据说样本量最好在4ml.出来的囊泡是<800nm的.而且这个是只提囊泡..Qiagen有试剂盒是直接提RNA的~
作者: Nichole0503    时间: 2015-10-29 15:36
同问，我十一月也要开始用这个试剂盒。大家互相交流。
作者: Nichole0503    时间: 2015-10-29 15:38
咏咩咩 发表于 2015-10-28 21:43
同问.!!之前问过技术支持.据说样本量最好在4ml.出来的囊泡是

恩，我的试剂盒就是直接提RNA的。请问他家技术支持电话号码是多少？我的号码打过去一直打不通，醉
作者: hzangs    时间: 2015-10-29 18:08
希望有人使用过之后可以写一个详尽的试用报告，供坛子里其他的朋友参考
作者: 张宏道    时间: 2015-10-30 10:45
Nichole0503 发表于 2015-10-29 15:38
恩，我的试剂盒就是直接提RNA的。请问他家技术支持电话号码是多少？我的号码打过去一直打不通，醉 ...

试剂盒你买的是哪个？价钱多少啊？现在还没有买在选择中。
作者: 张宏道    时间: 2015-10-30 10:48
hzangs 发表于 2015-10-29 18:08
希望有人使用过之后可以写一个详尽的试用报告，供坛子里其他的朋友参考 ...

有一篇文献，好像是qiagen公司跟别人合作的介绍他这个column，发表在plos one上面，感觉效果还是可以的，但是论坛上好像没有一个帖子是关于这个的
作者: 张宏道    时间: 2015-10-30 10:51
现在论坛上关于qEV使用的挺多的，我现在就是纠结是用qEV还是qiagen column，根据目前的数据来看，二者提取的EV在纯度和产量上和超离都是比较接近的，就是不知道性价比怎样了。
作者: hzangs    时间: 2015-10-30 12:50
张宏道 发表于 2015-10-30 10:51
现在论坛上关于qEV使用的挺多的，我现在就是纠结是用qEV还是qiagen column，根据目前的数据来看，二者提取 ...

qiagen的kit 我没有用过，而且对它的原理不太清楚，所以不敢贸然写评述。  如果楼主对这方面有了解，如果可以的话 还请楼主能够介绍一下
作者: 张宏道    时间: 2015-10-30 14:41
hzangs 发表于 2015-10-30 12:50
qiagen的kit 我没有用过，而且对它的原理不太清楚，所以不敢贸然写评述。  如果楼主对这方面有了解，如果 ...

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4552735/
这是那篇文献，可以看一下。据我了解，qiagen用的是亲和膜结合的方法，我猜测是和用离心柱提取DNA，RNA这种方法类似，他使用的膜可能可以特别的结合膜结构的物质，因此在提取之前需要进行超滤将其他的杂志都除去，保证只有EV这种膜结构的物质通过column然后被留下来。
作者: hzangs    时间: 2015-10-30 14:46
张宏道 发表于 2015-10-30 14:41
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4552735/
这是那篇文献，可以看一下。据我了解，qiagen用 ...

嗯，这篇paper我之前已经读过了。  也看到说 他们的分离方法是与膜的特性相关的 ，不过具体的原理 他们使用了什么样的东西促进膜与柱子结合 我还是不清楚
作者: 咏咩咩    时间: 2015-10-31 09:35
Nichole0503 发表于 2015-10-29 15:38
恩，我的试剂盒就是直接提RNA的。请问他家技术支持电话号码是多少？我的号码打过去一直打不通，醉 ...

我是直接打的4008800325问的.后来他发的邮件回复我.然后就继续邮件询问了~我没有技术支持的电话~
作者: 咏咩咩    时间: 2015-10-31 09:43
本帖最后由 咏咩咩 于 2015-10-31 10:05 编辑
张宏道 发表于 2015-10-30 10:45
试剂盒你买的是哪个？价钱多少啊？现在还没有买在选择中。

我也在了解中.正在设计实验所以就打听了一下.问了一下技术支持看看这个试剂盒适不适用.
ExoEasy Maxi Kit Cat #76064给我的报价是 5000-5500元  货期4-6周.~如果你买了多交流哈~
exoRNeasy serum/plasma midi kit Cat#77044  技术支持推荐了这款是可以直接提exosome RNA的..
或者你还有选择其他的试剂盒嘛?


作者: 咏咩咩    时间: 2015-11-1 09:40
Johnny 发表于 2015-10-31 13:49
这一个试剂盒  总共可以提多少血清 或者 细胞上清的外泌体？

20个~
https://www.qiagen.com/cn/shop/s ... orderinginformation
这个是官网上的介绍~
作者: 咏咩咩    时间: 2015-11-1 17:35
Johnny 发表于 2015-11-1 12:23
20个是什么意思？  每个能提多少mL呢？

20个柱子的意思..exoEasy Maxi Kit使用了膜亲和离心柱来高效地从血浆、血清、细胞培养上清及其他生物液体中提取获得exosome及其他细胞外囊泡。Maxi规格的离心柱可允许处理大体积的样品，包括高达4 ml的血浆或血清，或者32 ml的细胞培养上清。实验流程非常快速一致，非常适用于提取EV进行exosome及其他细胞外囊泡的功能性分析。官网上是这么写的...
作者: hzangs    时间: 2015-11-2 10:07
咏咩咩 发表于 2015-11-1 17:35
20个柱子的意思..exoEasy Maxi Kit使用了膜亲和离心柱来高效地从血浆、血清、细胞培养上清及其他生物液体 ...

以qiagen在生物领域的口碑，我感觉 这个kit应该不会有什么大问题。提取的RNA应该不会错。
但是  不知道qiagen有没有推出可以用来做动物或细胞实验的 exosomes 分离kit，毕竟现在这个kit用各种试剂加来加去的， 难免不会影响实验结果
作者: 咏咩咩    时间: 2015-11-3 08:48
hzangs 发表于 2015-11-2 10:07
以qiagen在生物领域的口碑，我感觉 这个kit应该不会有什么大问题。提取的RNA应该不会错。
但是  不知道qi ...

这个kit只是提EV的哦..提取RNA的话还要其他步骤.~我是想着用这个提EV然后再用TRIzol LS 提RNA不知道行不行.
直接提RNA的是exoRNeasy serum/plasma midi kit~
动物或者细胞实验就不知道啦~会不会用超高速比较好?
作者: 张宏道    时间: 2015-11-3 19:21
咏咩咩 发表于 2015-10-31 09:43
我也在了解中.正在设计实验所以就打听了一下.问了一下技术支持看看这个试剂盒适不适用.
ExoEasy Maxi Kit  ...

技术支持怎么联系啊，我给他们发邮件怎么没人回我。qiagen有四个试剂盒，除了你提的那两个还有一个start kit，里面有10个大的10个中的，还有20个提取RNA的column，另外还有一个是exoRNease maxi kit，50个大的加50个提取RNA的column，比较贵。个人想订start kit，大的中的都有了，就是不知道到货要多久。这个要问一下，多多交流。
作者: Nichole0503    时间: 2015-11-4 09:24
张宏道 发表于 2015-10-30 10:45
试剂盒你买的是哪个？价钱多少啊？现在还没有买在选择中。

买的starter kit，价格不知道，老板买的，估计4-5000吧。
作者: Nichole0503    时间: 2015-11-4 09:29
张宏道 发表于 2015-11-3 19:21
技术支持怎么联系啊，我给他们发邮件怎么没人回我。qiagen有四个试剂盒，除了你提的那两个还有一个start  ...

到货大概一个月。要用的话最好提早订
作者: 咏咩咩    时间: 2015-11-4 21:42
张宏道 发表于 2015-11-3 19:21
技术支持怎么联系啊，我给他们发邮件怎么没人回我。qiagen有四个试剂盒，除了你提的那两个还有一个start  ...

TechService-CN@qiagen.com  我用的是这个邮箱联系的.
我师姐他们用了start kit. 觉得Qiagen提出来的质量还是不错的.
exoRNease maxi kit和exoRNease midi kit主要就是上样的最大量不同.maxi好像可以上到最多4ml.midi应该是1ml.(这些官网上都有的~)
这两个怎么选择应该是看你的标本量有多少吧.
如果没有用过的话start kit我觉得是个不错的选择,当时我们师姐也是想着买来试试看的.但是如果确定了你的标本量也可以直接选择maxi 或 midi.
货期我也不清楚,师姐他们是年初的时候买的了.~这些问技术支持他会找相关的负责人给你报价和货期这些信息的.我试过用maxi提了一个尿液的RNA,效果还可以.
作者: 张宏道    时间: 2015-11-6 13:33
咏咩咩 发表于 2015-11-4 21:42
我用的是这个邮箱联系的.
我师姐他们用了start kit. 觉得Qiagen提出来的质量还是不错的.
exoRNease max ...

一般你们是从什么样品里面抽exosome？然后比如用midi的一次能得到多少RNA啊？
作者: 咏咩咩    时间: 2015-11-9 09:32
张宏道 发表于 2015-11-6 13:33
一般你们是从什么样品里面抽exosome？然后比如用midi的一次能得到多少RNA啊？ ...

我试过50ml尿液浓缩成3-4ml再用这个试剂盒.~RNA nanodrop 有15ng/ul吧.但是Quibit出来是5ng/ul左右.用的是maxi.
midi师姐他们做过血清.具体浓度就不太清楚了..是师姐他们的实验.~
作者: 咏咩咩    时间: 2015-11-9 09:37
张宏道 发表于 2015-11-6 13:33
一般你们是从什么样品里面抽exosome？然后比如用midi的一次能得到多少RNA啊？ ...

我试过50ml尿液浓缩成3-4ml再用这个试剂盒.~RNA nanodrop 有15ng/ul吧.但是Quibit出来是5ng/ul左右.用的是maxi.
midi师姐他们做过血清.具体浓度就不太清楚了..是师姐他们的实验.~
作者: 张宏道    时间: 2015-11-9 10:40
咏咩咩 发表于 2015-11-9 09:37
我试过50ml尿液浓缩成3-4ml再用这个试剂盒.~RNA nanodrop 有15ng/ul吧.但是Quibit出来是5ng/ul左右.用的 ...

我觉得quibit更加准一些，毕竟只检测RNA的信号，nanodrop就会受到DNA蛋白质等杂物质的影响，测得浓度高一些也正常。就算是5ng/ul,那么有多少ul呢？如果是20，那也有100ng了。不知道你能不能帮我问问你师姐用midi的一次能得到多少RNA啊，我好有个心理准备收集多少样品做实验，谢谢谢谢！
作者: 咏咩咩    时间: 2015-11-9 10:54
张宏道 发表于 2015-11-9 10:40
我觉得quibit更加准一些，毕竟只检测RNA的信号，nanodrop就会受到DNA蛋白质等杂物质的影响，测得浓度高一 ...

最后好像是用14ul洗脱下来的..
midi一次上样就只能上1ml吧?多了只能用maxi~上样4ml以下..
血清浓度好像比上清和尿更低吧.~
作者: 啦拉啦拉啦拉啦    时间: 2017-4-16 18:48
张宏道 发表于 2015-10-30 14:41
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4552735/
这是那篇文献，可以看一下。据我了解，qiagen用 ...

请问如果不用过滤膜而用离心机过滤的方法预过滤血浆样品，应该如何设置转速和时间才能让样品中大于0.8μm的分子去除呢？
作者: smile扣子    时间: 2018-3-5 09:25
用试剂盒提过几次，我们的上清量很大，做过电镜囊泡比较少，提了几次浓度都特别低，冻干蛋白后浓度才勉强到1，做WB效果很差，有没有大神指点一下。
作者: 柚子    时间: 2019-7-26 18:53
hzangs 发表于 2015-11-2 10:07
以qiagen在生物领域的口碑，我感觉 这个kit应该不会有什么大问题。提取的RNA应该不会错。
但是  不知道qi ...

我以前是qiagen的代理商，这个盒子肯定要比沉淀法好一些。但没有和qEV，wako的免疫亲和kit对比过（有文献说qiagen这个也会有一些杂蛋白）。这个试剂盒的洗脱液里含有高离序盐，说明书和技术都说这个试剂盒提出的外泌体能用于细胞培养。但是有客户反应，加了这个试剂盒提取的外泌体后，细胞会变形。
作者: whulwj2019    时间: 2019-10-28 10:24
亲测，效果不行



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