外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用

标题: 得到的外泌体储存在-80℃后，怎么溶解 [打印本页]

作者: Seagull 时间: 2015-11-9 14:33
标题: 得到的外泌体储存在-80℃后，怎么溶解
请教各位大神，得到的外泌体储存在-80℃后，怎么溶解，求指教，谢谢!

作者: 丁倩倩 时间: 2015-11-9 18:43
我们都是直接冰上溶解，之前听说有人也会先放-20，我觉得多少都会有些影响，最好现提现用吧

作者: hzangs 时间: 2015-11-9 19:34

丁倩倩发表于 2015-11-9 18:43
我们都是直接冰上溶解，之前听说有人也会先放-20，我觉得多少都会有些影响，最好现提现用吧 ...

嗯支持~~
我的分离的exosomes，凡是被零度以下冷冻过的，都只用来杂western，不再用于其他实验

作者: Seagull 时间: 2015-11-10 15:40

hzangs 发表于 2015-11-9 19:34
嗯支持~~
我的分离的exosomes，凡是被零度以下冷冻过的，都只用来杂western，不再用于其他实验 ...

你好，我用乳腺癌细胞MM231上清提取的外泌体，梯度离心，得到的量特别的少，请问有什么方法能使得到的外泌体的量多一些呢？还有你们收集细胞上清是收集到一定量才离心一次，还是收集一次离心一次呢？

作者: hzangs 时间: 2015-11-10 17:09

Seagull 发表于 2015-11-10 15:40
你好，我用乳腺癌细胞MM231上清提取的外泌体，梯度离心，得到的量特别的少，请问有什么方法能使得到的外 ...

exosomes的分出来的量确实很少。一般我们会一次培养很多细胞，然后一次一收，不会存放到一定量。
基本上都是15cm dish 3-5盘吧

作者: 习玉峰 时间: 2015-11-10 21:00
参考“小鼠胰岛微血管内皮细胞外泌体的提取和鉴定方法”文献
外泌体提取收集上述培养上清液后离心，
4 ℃，300 × g，低温离心 15 min，去除细胞及大细胞碎
片; 4 ℃，1 200 × g，低温离心 20 min，去除小细胞碎
片; 4 ℃， 10 000 × g，低温离心30 min，取上清液，小
心移至含 Tris /蔗糖/D20( 30 g 无酶蔗糖，2． 4 g Tris
碱溶于 50 mL D20 中，调至 pH 7． 4，过滤除菌备用)
超速离心管中，4 ℃ ，100 000 × g，离心 2 h，收集缓冲
垫; 预冷 PBS 混悬稀释后，4 ℃ ，100 000 × g离心2 h，
收集黄白色沉淀外泌体; PBS 重悬外泌体后，
0． 22 μm滤膜过滤除菌，－ 80 ℃ 保存备用; 待用时，
BCA 法定量外泌体的总蛋白。
大约 2 × 107 个 MS-1 细胞可提取( 200 ± 40) μg 外
泌体( 按 BCA 蛋白定量法计量)

作者: WA1 时间: 2024-8-30 10:47
在－80℃怎么保存，保护剂·

欢迎光临外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用 (http://exosome.com.cn/)

外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes &amp; microvesicles—小膜泡大作用

外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用