外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用

标题: 问一下大家都用什么试剂破坏exosome的膜结构啊 [打印本页]

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作者: 微泡biomarker    时间: 2015-11-10 09:58
标题: 问一下大家都用什么试剂破坏exosome的膜结构啊
本人刚接触exosome，在使用了试剂盒得到了exosome后，不知道那种试剂适合破除exosome的膜。顺便问一下大家，破膜之后都用什么方法得到蛋白啊？ 希望大家多多支持，多多回答哦。

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作者: 习玉峰    时间: 2015-11-10 20:55
50ul 的exosomes PBS悬液，再加入50ul 的RIPA裂解液（强），冰上裂解30min。

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作者: 微泡biomarker    时间: 2015-11-11 16:36

习玉峰 发表于 2015-11-10 20:55
50ul 的exosomes PBS悬液，再加入50ul 的RIPA裂解液（强），冰上裂解30min。

非常感谢呢，能不能再问一下50 ul能得到多少的蛋白啊，还有事用什么沉淀的蛋白呢？

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作者: 熊胖    时间: 2015-11-11 20:00

习玉峰 发表于 2015-11-10 20:55
50ul 的exosomes PBS悬液，再加入50ul 的RIPA裂解液（强），冰上裂解30min。

请问一下你RIPA加cocktail么？

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作者: 习玉峰    时间: 2015-11-13 09:35

微泡biomarker 发表于 2015-11-11 16:36
非常感谢呢，能不能再问一下50 ul能得到多少的蛋白啊，还有事用什么沉淀的蛋白呢？ ...

取决于你从多少细胞培养上清中分离exosomes，最后用多少PBS重悬，两者比例大概是100:1，得到的exosomes蛋白接近1ug/ul。（文献上讲的有，还是多看文献吧！）

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作者: 习玉峰    时间: 2015-11-13 10:17

熊胖 发表于 2015-11-11 20:00
请问一下你RIPA加cocktail么？

对呀，抑制蛋白降解

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作者: murong    时间: 2016-2-23 15:53
学习了，谢谢

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作者: meiling    时间: 2017-5-31 14:11

习玉峰 发表于 2015-11-13 10:17
对呀，抑制蛋白降解

请问PMSF是不是也是抑制蛋白裂解呢？

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作者: sonhakuuu    时间: 2019-1-23 09:54

习玉峰 发表于 2015-11-10 20:55
50ul 的exosomes PBS悬液，再加入50ul 的RIPA裂解液（强），冰上裂解30min。

请问冰上裂解30min后需要离心吗？离心转速是多少呀？离心时间呢？

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作者: shuizhu    时间: 2019-10-9 14:21
你好，我问下细胞上的膜蛋白是不是也会存在于外泌体的膜上呀，谢谢

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作者: DBLB    时间: 2019-10-25 10:09

习玉峰 发表于 2015-11-10 20:55
50ul 的exosomes PBS悬液，再加入50ul 的RIPA裂解液（强），冰上裂解30min。

您好，我昨天就是这么处理的！请问您做出来蛋白浓度如何。

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作者: DBLB    时间: 2019-10-25 10:15

习玉峰 发表于 2015-11-13 09:35
取决于你从多少细胞培养上清中分离exosomes，最后用多少PBS重悬，两者比例大概是100:1，得到的exosomes蛋 ...

您好，请问您RIPA裂解完了之后，需要煮蛋白离心然后再去测浓度吗。还是裂解完了直接用BCA试剂盒测就行了

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