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标题: 如何制备exosome-free FBS，并保证其无菌用以培养细胞？ [打印本页]
作者: 流氓兔2841    时间: 2015-11-19 10:22
标题: 如何制备exosome-free FBS，并保证其无菌用以培养细胞？
最近想开展细胞实验，制备exosome-free FBS倒不是什么难事，关键是怎么保证其无菌来培养细胞，一直卡在这里，希望大神们指导！谢谢！
作者: 陆峰彬    时间: 2016-5-7 15:51
楼主，请问你培养怎么样？怎么保证无菌？请指教，多谢了
作者: lenoch    时间: 2016-5-11 12:50
0.22过滤
作者: divebomb    时间: 2016-6-17 09:41
过滤可以的，我刚试完
作者: upboom    时间: 2016-7-7 08:48
0.22过滤，难道不会将BS中的营养物质过滤掉么？
作者: cherylsun    时间: 2017-7-11 00:22
divebomb 发表于 2016-6-17 09:41
过滤可以的，我刚试完

请问022um过滤是指无外泌体血清过夜超速离心后取上清再进行0.22um过滤，后面都无菌操作是吗？后续要做共培养，再请教一下，分离的外泌体如何无菌，特别是在超速离心机上，我这边的转子配的管子都是开口的
作者: memorywind    时间: 2017-7-11 08:37
本帖最后由 memorywind 于 2017-7-11 08:43 编辑
cherylsun 发表于 2017-7-11 00:22
请问022um过滤是指无外泌体血清过夜超速离心后取上清再进行0.22um过滤，后面都无菌操作是吗？后续要做共 ...

我用Beckman的超高速離心機，管子也都是開口的。使用前離心的鐵管蓋子會噴酒精，塑膠管會滅菌，我用的塑膠管材質可以滅菌。然後我是在無菌台裡分裝FBS到管子，蓋上鋁箔拿到外面快速秤重(鋁箔不會一起秤)，再拿回無菌台balance，離心時保持4度C，隔天離心完之後取上清直接在無菌台裡進行0.22um過濾，之後都是無菌操作。我這樣做已經離心過很多次FBS也收過很多次細胞的exosome，不會汙染，細胞也會長，看不出來和一般FBS養的細胞有什麼差異。所以用0.22um過濾應該不會太嚴重造成FBS營養流失之類的。PS.我養的是腫瘤細胞，FBS離心是100%的FBS，不會先配製成培養液在離心。
作者: divebomb    时间: 2017-7-28 13:29
cherylsun 发表于 2017-7-11 00:22
请问022um过滤是指无外泌体血清过夜超速离心后取上清再进行0.22um过滤，后面都无菌操作是吗？后续要做共 ...

对，后面就是无菌操作了。外泌体无菌操作很难，但是一般不会污染细胞。这个问题我也纠结过一段时间，最后一步PBS复溶的时候用无菌PBS，尽量超净台里面做，可能会好点。
作者: divebomb    时间: 2017-7-28 13:35
upboom 发表于 2016-7-7 08:48
0.22过滤，难道不会将BS中的营养物质过滤掉么？

这个不至于，还用人用无血清培养基养细胞呢。
作者: exosor    时间: 2017-7-28 19:18
Beckman 也有可以高压灭菌的管子，到官网或者工程师都可以联系买到
作者: 127913abc    时间: 2018-2-26 11:50
divebomb 发表于 2017-7-28 13:29
对，后面就是无菌操作了。外泌体无菌操作很难，但是一般不会污染细胞。这个问题我也纠结过一段时间，最后 ...

请问楼主，你的意思是敞口的玻璃瓶提取的外泌体，在用无菌的PBS复溶之后，基本就可以做到无菌，直接可以去加到细胞培养中，不用再进行过滤了吗



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