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标题: qEV血清稀释后为何蛋白量的问题 [打印本页]
作者: 丝瓜    时间: 2015-12-18 11:18
标题: qEV血清稀释后为何蛋白量的问题
前段时间由于实验需要，买了一盒qEV回来试用，也在做它的效果评价。
因为细胞上清用qEV效果很好，我试着做的是血清的。
血清比较粘稠，考虑到即使过柱可能也会有一些较大的损耗，所以我讲血清做了一个梯度的稀释再用qEV提取。
2ml的血清原液直接提取蛋白浓度和稀释一倍之后的差别很大啊，接下去我该怎么比较呢？如果颗粒浓度跟蛋白浓度一样是递增的，该如何选择好的稀释倍数呢。
而且稀释倍数越大蛋白浓度也越高，也跟超高速的比较过。
我到时做了nanosight之后再算纯度么？这样得出来的有意义么？~
求助下论坛里的大牛们啊~~
作者: hzangs    时间: 2015-12-18 11:51

我做血清不多，但是有过尝试。 你的这个结果可能与qEV的反复使用有关。


qEV分离血清   每次基本只能上样0.5ml， 过多的样品 可能会影响洗脱组分的。  我当时是给我们小老板试用qEV的时候做的，同一只qEV  分离血清 基本只可以做3次，第四次洗脱的时候 0-3ml组分里 会有数量可观的杂蛋白存在。   因为我做的不多 所以只能做一点分析，  个人认为可能是血清中蛋白组分过于复杂，所以每次qEV分离血清都会有杂蛋白和柱材强结合和弱结合，  只用PBS清洗柱材 不能达到清除残留杂蛋白的效果。  使用两三次还是可以的，但是使用两三次后  柱子内残留的结合的杂蛋白会很多，基本就不能在用了。



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