外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用

标题: 新手 sbi试剂盒提取的内皮祖细胞外泌体的的相关问题 [打印本页]
作者: exo    时间: 2015-12-21 12:33
标题: 新手 sbi试剂盒提取的内皮祖细胞外泌体的的相关问题
sbi试剂盒提取具体步骤：
1、内皮祖细胞培养液3000g离心15分钟，取上清。
2、0.22μm除菌滤器过滤。
3、培养液上清与提取试剂5:1，颠倒3次，静置12小时。
4、1500g离心30分钟，吸除上清。1500g,离心5分钟，进一步去除残余上清。
5、PBS重悬，-80℃保存。

问题一：培养细胞用的血清，120000g离心150分钟，离心以后看不到沉淀，不知是否可行？
问题二：沉淀以后，可见大量白色沉淀，是否有可能来源于培养液中的血清？
问题三：试剂盒提取的外泌体做功能试验，受到质疑的几率有多大？
问题四：提取过程有什么问题，哪里需要改正?

新手，大神受累指教！
作者: exo    时间: 2015-12-21 12:41
补充：血清是beckman的离心机120000g离心,因为超离管是敞口的，所以离完之后为防止污染，用前0.22μm除菌滤器过滤。
作者: 子非鱼    时间: 2015-12-23 14:27
我觉得你提的问题都有道理，坛子里都或多或少讨论过，你可以浏览看看，特别是几个斑竹和炒鸡斑竹的帖子
作者: 华猪猪2005    时间: 2016-2-24 01:05
说是100nm的提不出来？
作者: exo    时间: 2016-2-24 13:23
电镜下大小多在40——80nm
作者: spencerliu    时间: 2016-3-26 09:21
我用101bio kit提取的胶质瘤细胞的exo size也是在40nm到80nm左右。不知道到底是不是
作者: exo    时间: 2016-3-27 12:14
spencerliu 发表于 2016-3-26 09:21
我用101bio kit提取的胶质瘤细胞的exo size也是在40nm到80nm左右。不知道到底是不是 ...

WB、电镜验证下



欢迎光临 外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用 (http://exosome.com.cn/) Powered by Discuz! X3.3