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标题: exosome -free 的血清获取方式 [打印本页]

作者: weaver 时间: 2015-12-30 10:13
标题: exosome -free 的血清获取方式
本人从细胞中提取外泌体，求无外泌体血清的获取方式？有没有公司专门卖这个的，求联络方式。。。

作者: arsenal-xie 时间: 2015-12-30 11:56
可以咨询一下吉泰生物，他们有代理SBI的系列产品，exo-free FBS，价格比较贵，50ml就要2100左右。坛子里还有前辈推荐的武汉创新科技的一个代理，QQ联系方式：525772776

作者: arsenal-xie 时间: 2015-12-30 11:57
如果有超速离心机就自己超离再0.22um滤菌制备吧

作者: hzangs 时间: 2015-12-30 14:47
有超速离心机的话， 110000g 超速离心过夜（14-16小时），取上清，用0.45um的滤器过滤除菌。即可
这种处理的血清养肿瘤细胞是没问题的。养一般的细胞也基本没事。养娇贵的细胞可能就要尝试一下才知道了

作者: yy8651 时间: 2015-12-30 22:41
这种血清，巨巨巨贵！而且正规途径买不到

作者: 流氓兔2841 时间: 2015-12-31 09:32

hzangs 发表于 2015-12-30 14:47
有超速离心机的话， 110000g 超速离心过夜（14-16小时），取上清，用0.45um的滤器过滤除菌。即可
这 ...

可以用0.22μm的过滤器吗

作者: hzangs 时间: 2015-12-31 11:21

流氓兔2841 发表于 2015-12-31 09:32
可以用0.22μm的过滤器吗

这个不好说。你直接用这样处理的血清去养细胞呗。细胞没事那就可以

作者: 子非鱼 时间: 2015-12-31 16:44

arsenal-xie 发表于 2015-12-30 11:56
可以咨询一下吉泰生物，他们有代理SBI的系列产品，exo-free FBS，价格比较贵，50ml就要2100左右。坛子里还 ...

我联系过这个人了，也是50ml2100

作者: 某只包子 时间: 2016-1-26 14:38

hzangs 发表于 2015-12-30 14:47
有超速离心机的话， 110000g 超速离心过夜（14-16小时），取上清，用0.45um的滤器过滤除菌。即可
这 ...

需要超速离心这么久（10多个小时）吗？我一直10万g4小时左右。。。
不知道会不会血清里的exosome没有去除完全？

作者: wangjoseph 时间: 2016-1-26 15:44

某只包子发表于 2016-1-26 14:38
需要超速离心这么久（10多个小时）吗？我一直10万g4小时左右。。。
不知道会不会血清里的exosome没有去除 ...

四个小时是不够的，你应该检测去除干净没有啊。
请参考 Baranyai T et al., 2015, PLOS ONE

作者: hzangs 时间: 2016-1-26 17:54

某只包子发表于 2016-1-26 14:38
需要超速离心这么久（10多个小时）吗？我一直10万g4小时左右。。。
不知道会不会血清里的exosome没有去除 ...

4个小时，还是不行的…… 安全起见超速离心过夜是很有必要的。

作者: 某只包子 时间: 2016-1-27 11:06

hzangs 发表于 2016-1-26 17:54
4个小时，还是不行的…… 安全起见超速离心过夜是很有必要的。

超离12h 一般可以去除干净吗？除了电镜还有什么能确定是否去除干净？
我明天试试超离过夜，我原来一直用提取exosome的方法去除血清的exosome= =
还好没有开始打老鼠。。。不知道之前的细胞实验会不会受影响。。。我是一个孔20ug exosome（6-well plate）
还有想请问下你们BSA定量可以很准确吗？因为我们有nanno2000分光光度计，我有的时候直接用它测浓度好像和BSA定量的值不太一样。。不知道你们是每次都用BSA定量吗？

作者: 某只包子 时间: 2016-1-27 11:08

wangjoseph 发表于 2016-1-26 15:44
四个小时是不够的，你应该检测去除干净没有啊。
请参考 Baranyai T et al., 2015, PLOS ONE ...

感谢~！
一般怎么检测是否去除干净呢？超离过夜就可以吗？

作者: hzangs 时间: 2016-1-27 11:21

某只包子发表于 2016-1-27 11:06
超离12h 一般可以去除干净吗？除了电镜还有什么能确定是否去除干净？
我明天试试超离过夜，我原来一直用 ...

那个东西我们也有。但是从来不用来测蛋白浓度。。。不准。都是用BCA定量

作者: 某只包子 时间: 2016-1-27 11:42

hzangs 发表于 2016-1-27 11:21
那个东西我们也有。但是从来不用来测蛋白浓度。。。不准。都是用BCA定量 ...

好吧= = 感觉之前实验误差确实蛮大的
我不知道我们的离心机能不能过夜- -是BECKMAN的

作者: hzangs 时间: 2016-1-27 11:53

某只包子发表于 2016-1-27 11:42
好吧= = 感觉之前实验误差确实蛮大的
我不知道我们的离心机能不能过夜- -是BECKMAN的

beckman的不知道，日立的可以我们单位是日立的我经常过夜 o(╯□╰)o 不过最近经常出毛病。。。

作者: 某只包子 时间: 2016-1-27 13:23

hzangs 发表于 2016-1-27 11:53
beckman的不知道，日立的可以我们单位是日立的我经常过夜 o(╯□╰)o 不过最近经常出毛病。。 ...

= =不会是因为过夜次数太多了吧
第一次16h 我还是陪在旁边
刚才去问过工程师了 bechman可以16h 10wg的
对了你们用的离心管都是一次性的吗？我们之前配了套管子结果居然不是一次性的= =
不知道离血清可以用这种不是一次性的吗= =

作者: weaver 时间: 2016-3-2 10:56

arsenal-xie 发表于 2015-12-30 11:56
可以咨询一下吉泰生物，他们有代理SBI的系列产品，exo-free FBS，价格比较贵，50ml就要2100左右。坛子里还 ...

谢谢。。。。。。。。。。。。。。。。。。。

作者: weaver 时间: 2016-3-2 10:58

子非鱼发表于 2015-12-31 16:44
我联系过这个人了，也是50ml2100,

我们可不可以一起买，看看他能不能便宜些呢

作者: 子非鱼 时间: 2016-3-4 13:07

weaver 发表于 2016-3-2 10:58
我们可不可以一起买，看看他能不能便宜些呢

我的已经到货了

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