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标题: 第一次超离过夜的血清~沉淀好多 [打印本页]

作者: 某只包子 时间: 2016-2-1 11:23
标题: 第一次超离过夜的血清~沉淀好多
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BECKMAN 16h 血清10wg 过夜- -
第一次离不知道怎么这么多沉淀
大家也是每次离心完这么多沉淀吗？
沉淀在下面的一些没有附在管壁上的沉淀是什么？
最后0.22um滤菌
不知道会不会影响细胞= =

作者: 篱下客 时间: 2016-2-2 17:11
你这个血清没做前处理吧~

作者: seallin 时间: 2016-2-3 11:38
我记得有些文献说18h离心才能除去90%以上的exo，所以我一般都会超过18小时

作者: hzangs 时间: 2016-2-3 14:53
楼主是多少ml血清超离的？这个量有点大

作者: zqy2002 时间: 2016-2-3 22:52
是用有血清培养基培养的吧~

作者: 某只包子 时间: 2016-2-4 10:49

篱下客发表于 2016-2-2 17:11
你这个血清没做前处理吧~

前处理要怎么处理呢？

作者: 某只包子 时间: 2016-2-4 10:51

seallin 发表于 2016-2-3 11:38
我记得有些文献说18h离心才能除去90%以上的exo，所以我一般都会超过18小时

= = 就是文献上说要超过16h 我就16h了
那么下次在时间长一点好了~
不知道一般回离出多少沉淀？

作者: 某只包子 时间: 2016-2-4 10:52

hzangs 发表于 2016-2-3 14:53
楼主是多少ml血清超离的？这个量有点大

50ml= =
我也觉得量太大了，而且下面的沉淀感觉是胶质的黏黏的那种= =
不知道是啥。。。

作者: 某只包子 时间: 2016-2-4 10:53

zqy2002 发表于 2016-2-3 22:52
是用有血清培养基培养的吧~

就是纯血清离心制备无exosome血清= =

作者: hzangs 时间: 2016-2-5 19:35

某只包子发表于 2016-2-4 10:52
50ml= =
我也觉得量太大了，而且下面的沉淀感觉是胶质的黏黏的那种= =
不知道是啥。。。 ...

看paper里，一般是把血清稀释20倍，然后按照超离培液的方法超离

作者: cherry 时间: 2016-3-14 14:54

Johnny 发表于 2016-2-6 19:34
去除血清中的外泌体应该是稀释5倍，浓度为20%超离

为什么我看到的文献里说是稀释一半后进行血清超离？

作者: w403185742 时间: 2016-4-5 20:13
楼主用的方法我也试过，我是用125000g 4℃ 离心18h，最后也会得到像你这样的黏糊糊的沉淀，我尽量重悬后拍了电镜，上清液我也拍了电镜，但是好像里面仍然有东西，不知道外泌体是否被去除掉了

作者: 某只包子 时间: 2016-4-26 19:47

w403185742 发表于 2016-4-5 20:13
楼主用的方法我也试过，我是用125000g 4℃ 离心18h，最后也会得到像你这样的黏糊糊的沉淀，我尽量重悬后拍 ...

我细胞上清里出来的外泌体是沉淀的样子，这种粘乎乎的感觉并不都是外泌体聚集，应该是长时间离心把一部分血清内容物离出来了吧。我后来用这种血清养的细胞的上清做了nanosight感觉均一性还行，我一般最后的高速离心前会用0.22um过滤一次。

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