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标题: 血清外泌体提取(试剂盒)求助 [打印本页]

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作者: zyjjxb    时间: 2016-4-1 16:34
标题: 血清外泌体提取(试剂盒)求助
我用的是试剂盒提取血清外泌体，600ul血清，加入试剂离心后得到黄色粘稠状沉淀，BC测蛋白浓度高的吓人，有没有朋友帮我看看是什么问题，有同样的情况吗！是不是杂蛋白太多？

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作者: hzangs    时间: 2016-4-4 14:10
如果蛋白浓度高的吓人，  那基本可以确定 沉淀就是杂蛋白。

600ul 血清 可以收到的量大约在几十微克的样子

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作者: dengsilong1991    时间: 2016-4-6 12:07
我用沉淀试剂盒提取物做了WB，显出的阴性内参也很浓，说明不纯，肯定有很多杂蛋白

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作者: zyjjxb    时间: 2016-4-7 20:32

dengsilong1991 发表于 2016-4-6 12:07
我用沉淀试剂盒提取物做了WB，显出的阴性内参也很浓，说明不纯，肯定有很多杂蛋白 ...

现在怎么样了，CD63跑的出来吗

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作者: dengsilong1991    时间: 2016-4-8 09:40

zyjjxb 发表于 2016-4-7 20:32
现在怎么样了，CD63跑的出来吗

我没有跑CD63，跑得是CD9、TSG101和阴性内参Cal，我用了两种试剂盒，其中一种CD9和TSG101都跑出来了，但是Cal还很浓，另外一个试剂盒提取的CD9跑得很淡，但是没Cal

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作者: wooway    时间: 2016-4-8 11:24
你用的什么试剂盒、？如果是LIFE的你提取到的是黄色的很有可能是没有混匀，蛋白浓度是很高！

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作者: zyjjxb    时间: 2016-4-13 17:17
life的试剂盒，我想问下沉淀有多少的PBS重悬？还是说直接加裂解液开始裂解？我是新手 求指教啊

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作者: lanmls    时间: 2016-5-20 00:16

hzangs 发表于 2016-4-4 14:10
如果蛋白浓度高的吓人，  那基本可以确定 沉淀就是杂蛋白。

600ul 血清 可以收到的量大约在几十微 ...

版主，求指教，1ml人血清，梯度超速离心，110000g离心2h，后0.22um过滤，后110000g70min再离心，出来后应该有多少外泌体or蛋白呢？肉眼看不到沉淀是正常的吗？要想看到沉淀，是应该16h/18h？过夜超速离心吗？

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作者: hzangs    时间: 2016-5-20 20:11

lanmls 发表于 2016-5-20 00:16
版主，求指教，1ml人血清，梯度超速离心，110000g离心2h，后0.22um过滤，后110000g70min再离心，出来后应 ...

在110000g的时候还是需要稀释一下。大概稀释20倍的样子 就可以。 最后会看到一点沉淀。我是没有超离过血清，但是同学有做，应该是可以看到沉淀的。

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