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标题: 外泌体粒径分析 [打印本页]

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作者: 10302120shao    时间: 2016-4-2 17:31
标题: 外泌体粒径分析
大家有测定外泌体粒径和电位吗？你们的样品都是怎么处理的？为什么我测出来的粒径都400多，分散性也特别差。电位居然还有正值？求交流

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作者: hzangs    时间: 2016-4-4 14:09
电位没有考虑过，主要看粒径分布。 一般粒径在100nm附近，类似于正态分布。
你的粒径如果都是400多 而且很集中。可能分离到的不是exosome。 但这一点需要配合电镜图来确定

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作者: 10302120shao    时间: 2016-4-5 08:59
那你测定的样品是怎么处理的？我的就是用PBS适当稀释后测定的，我怀疑是聚集了。会有这样情况吗？电镜我也拍了，跟文献比对，觉得还蛮像的，不知道粒径为什么会那样。

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作者: fight2015    时间: 2016-4-5 16:16
请问你测粒径和电位用的什么仪器，电位及纳米激光粒度分析仪可以么？

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作者: hzangs    时间: 2016-4-5 18:24

10302120shao 发表于 2016-4-5 08:59
那你测定的样品是怎么处理的？我的就是用PBS适当稀释后测定的，我怀疑是聚集了。会有这样情况吗？电镜我也 ...

你可以将自己拍的电镜图 打上一些明显的直线，防止被别人盗用。  然后发到这里  
我可以帮你看一下是不是外泌体。   通常情况下，如果你在电镜下可以看到经典的外泌体结构，那粒径分布不会有太大的问题。

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作者: 10302120shao    时间: 2016-4-5 18:51

fight2015 发表于 2016-4-5 16:16
请问你测粒径和电位用的什么仪器，电位及纳米激光粒度分析仪可以么？

应该可以吧，我用的是动态光散射，原理应该大同小异

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作者: 10302120shao    时间: 2016-4-5 19:20

tyizon 发表于 2016-4-5 13:25
外泌体分析  www.izon.com

这个用起来很贵吧……

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作者: 10302120shao    时间: 2016-4-6 13:09
大神们帮忙看看这是不是外泌体？我是用差速离心方法分离的

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作者: hzangs    时间: 2016-4-6 13:16

10302120shao 发表于 2016-4-6 13:09
大神们帮忙看看这是不是外泌体？我是用差速离心方法分离的

这个看上去，应该是exosome了，问题不大。  粒径分析 重新做一下，应该没问题的。

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作者: hzangs    时间: 2016-4-6 13:19
你可以看一下JCI上最近发的那些review里的一篇。 讲分离纯化方法的。 这个看上去 还是有些不纯

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作者: 10302120shao    时间: 2016-4-6 14:54

hzangs 发表于 2016-4-6 13:16
这个看上去，应该是exosome了，问题不大。  粒径分析 重新做一下，应该没问题的。 ...

是要分离出来立刻测是不？放久了，会聚集吗？

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作者: hzangs    时间: 2016-4-6 15:08

10302120shao 发表于 2016-4-6 14:54
是要分离出来立刻测是不？放久了，会聚集吗？

我试过放置很久。 大概十多天在四度。 基本没问题。

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作者: xiangsara    时间: 2016-4-6 18:09
请问楼主粒径分析是在哪儿做的？

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作者: fight2015    时间: 2016-4-7 11:22

10302120shao 发表于 2016-4-5 18:51
应该可以吧，我用的是动态光散射，原理应该大同小异

麻烦能发一份实验步骤么？我想尝试一下

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作者: 10302120shao    时间: 2016-4-7 12:29

hzangs 发表于 2016-4-6 15:08
我试过放置很久。 大概十多天在四度。 基本没问题。

也许是我提的不纯，我在试试

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作者: 10302120shao    时间: 2016-4-7 12:30

hzangs 发表于 2016-4-6 13:19
你可以看一下JCI上最近发的那些review里的一篇。 讲分离纯化方法的。 这个看上去 还是有些不纯 ...

好的，谢谢

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作者: 10302120shao    时间: 2016-4-7 12:33

Johnny 发表于 2016-4-6 16:58
这个电镜图的效果还是很不错的  哈哈哈

可是背景黑黑的……有点……。老师说染菌啦

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作者: 10302120shao    时间: 2016-4-7 12:34

xiangsara 发表于 2016-4-6 18:09
请问楼主粒径分析是在哪儿做的？

在我们学校，就是用平常测纳米粒的粒径仪测的，可是测出的结果总不靠谱

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作者: 10302120shao    时间: 2016-4-7 12:36

fight2015 发表于 2016-4-7 11:22
麻烦能发一份实验步骤么？我想尝试一下

没有什么特别的实验步骤，就是将样品稀释一下，去仪器上测定就好啦

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作者: 微泡biomarker    时间: 2016-4-7 19:23

10302120shao 发表于 2016-4-6 13:09
大神们帮忙看看这是不是外泌体？我是用差速离心方法分离的

能问一下 这个电镜是怎么制样的吗，是用什么电镜拍的啊，效果好好呢

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作者: 微泡biomarker    时间: 2016-4-7 19:23

10302120shao 发表于 2016-4-6 13:09
大神们帮忙看看这是不是外泌体？我是用差速离心方法分离的

能问一下 这个电镜是怎么制样的吗，是用什么电镜拍的啊，效果好好呢

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作者: 10302120shao    时间: 2016-4-8 10:55

微泡biomarker 发表于 2016-4-7 19:23
能问一下 这个电镜是怎么制样的吗，是用什么电镜拍的啊，效果好好呢

就是将样品置于铜网上，用醋酸双氧铀负染，我的样品浓度可能高一些。使用的是TEM

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作者: ZHAO    时间: 2016-6-23 15:48
请问楼主用什么方法提到的外泌体
电镜在哪做的
谢谢！

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作者: 步步唧唧    时间: 2017-4-6 11:11

10302120shao 发表于 2016-4-8 10:55
就是将样品置于铜网上，用醋酸双氧铀负染，我的样品浓度可能高一些。使用的是TEM ...

请问一下醋酸双氧铀浓度是1%的还是多少？另外负染时间多少？谢谢

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作者: huangjingwei24    时间: 2017-5-10 13:56
0.22um 滤膜过滤一下

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作者: huangjingwei24    时间: 2017-5-27 15:07

hzangs 发表于 2016-4-4 14:09
电位没有考虑过，主要看粒径分布。 一般粒径在100nm附近，类似于正态分布。
你的粒径如果都是400多 而且很 ...

请教一下，单一样品外泌体做NTA分析，结果接近正太分布，但是在86nm和112nm处有两个峰，这种情况属于正常么？

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作者: huangjingwei24    时间: 2017-5-27 15:09

hzangs 发表于 2016-4-4 14:09
电位没有考虑过，主要看粒径分布。 一般粒径在100nm附近，类似于正态分布。
你的粒径如果都是400多 而且很 ...

我用的是 马尔文公司 Nanosight 300仪器测的

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作者: 301urology    时间: 2017-7-2 16:22

hzangs 发表于 2016-4-4 14:09
电位没有考虑过，主要看粒径分布。 一般粒径在100nm附近，类似于正态分布。
你的粒径如果都是400多 而且很 ...

版主您好，我做的粒径在130左右，正态，电镜看过应该是外泌体，请问这个大小是正常范围吗

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作者: hzangs    时间: 2017-7-3 10:16

301urology 发表于 2017-7-2 16:22
版主您好，我做的粒径在130左右，正态，电镜看过应该是外泌体，请问这个大小是正常范围吗 ...

可以了。  如果reviewer 质疑， 你可以引述2016年 thery的综述。里面有提及过这个直径问题

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作者: peggy4598690    时间: 2017-12-29 11:38
我也想請教電鏡的詳細方法!

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作者: wchl0918    时间: 2018-7-27 18:23
第二张和第三张中小圆的看着像，一四不像

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