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标题: fbs去除exosomes [打印本页]

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作者: 5五吾    时间: 2016-4-18 12:53
标题: fbs去除exosomes
大家都是怎么去除fbs中的exosomes，有文献提到用20%的fbs做超离去除fbs中的exosomes，但感觉一次超离能得到的exosome－free 培养基太少了，因为做一次超离也不太容易。想请教各位大神，可以把fbs的浓度调高点，比如40%去做超离可以吗？40%会不会太粘稠影响超离的效果。

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作者: hzangs    时间: 2016-4-18 17:42
我的FBS  是不稀释    直接超速离心14-16小时

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作者: 5五吾    时间: 2016-4-19 20:16

hzangs 发表于 2016-4-18 17:42
我的FBS  是不稀释    直接超速离心14-16小时

听同学说那样太粘稠了，今天用40%的去超离了，明天看看效果。
我看隔壁实验室的，去除血清中外泌体，只12000g 3h，不知道这样的效果怎样。
我们这边超离的机器，超过8h后每个小时另加收20元，感觉有点贵。

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作者: ssydll    时间: 2016-4-26 23:12
不知道Z直接去除exo-FBS多少钱？

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作者: 5五吾    时间: 2016-4-27 16:03

ssydll 发表于 2016-4-26 23:12
不知道Z直接去除exo-FBS多少钱？

问了gibco中国，那种fbs在国内没的卖，且在国外的售价很贵！

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作者: ssydll    时间: 2016-4-28 21:30
我去，这可怎么办？不知道应用牛血清白蛋白能不能代替？

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作者: sharuru    时间: 2016-4-29 08:49

ssydll 发表于 2016-4-28 21:30
我去，这可怎么办？不知道应用牛血清白蛋白能不能代替？

亲测不能代替

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作者: ssydll    时间: 2016-5-2 19:26
谢谢，看来只能慢慢自己处理了！

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作者: lenoch    时间: 2016-5-3 19:32
超离FBS肯定不是稀释后超离的，可以梯度离心，先800G，增加至2000G，每次离心都是为了去除多余的杂志。最后上机100000G离心一晚上。第二天就可以收集exosome Free的FBS了。然并卵，我个人感觉这没什么用。
因为细胞在加了血清之后产生的exosome较饥饿时候要少，更要命的是如果你没有能够超离的机器，就只能依赖SBI的kit，这时候最麻烦的事情来了，上清中会有很多的蛋白。这些蛋白我可以保证是在饥饿状态下分泌很少的，但是一旦有血清状态下不知为啥总有很多蛋白，而且这些蛋白似乎不是来源于血清的。因为我尝试用Kit沉淀相同体积的血清，得到的蛋白沉淀微乎其微。life公司的技术人员认为这是细胞分泌的。他们就会和exosome夹杂在一起，被大量的沉淀下去。使用BCA定量你会欣喜的发现有很多很多…………结果真正的exosome只是夹杂在其中的很少的一点…………

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