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标题: 细胞培养上清离心法提取外泌体 [打印本页]

作者: fjzmx 时间: 2014-12-28 22:10
标题: 细胞培养上清离心法提取外泌体
我用了25cm2的培养瓶培养细胞，上清液按文献方法离心后，得不到沉淀，求解啊！

作者: ffp1988 时间: 2014-12-29 08:24
你用了多少ml离心的

作者: fjzmx 时间: 2015-1-1 21:09
20ml，用50ml高速离心管，PBS补到4/5体积

作者: rubisco 时间: 2015-1-18 22:28
是不是离心的损失很大啊？

作者: 晓庆妞87 时间: 2015-2-5 16:14
太少了，我都是两三百毫升的离

作者: 旋转的尾音 时间: 2015-3-6 17:06

晓庆妞87 发表于 2015-2-5 16:14
太少了，我都是两三百毫升的离

你好，如果是这么大的量，是装在什么里面进行离心的呢？求科普~！~！

作者: 旋转的尾音 时间: 2015-3-7 10:59

Johnny 发表于 2015-3-6 18:48
离心的管子有那种大容量的

科研小白还没见到过~

作者: 晓庆妞87 时间: 2015-3-8 22:15

旋转的尾音发表于 2015-3-6 17:06
你好，如果是这么大的量，是装在什么里面进行离心的呢？求科普~！~！

这个得看你的超离的机器和转头啊，我们医院这边的超离机子就两个转头，最大也只有30ml的离心管，不过一次可以离八个，一次可以离240ml，去掉上清，最后用PBS一个一个吹管底部合起来就可以啦

作者: 旋转的尾音 时间: 2015-3-9 14:16

晓庆妞87 发表于 2015-3-8 22:15
这个得看你的超离的机器和转头啊，我们医院这边的超离机子就两个转头，最大也只有30ml的离心管，不过一次 ...

谢谢啦~！

作者: 向荣y 时间: 2015-3-25 19:26

晓庆妞87 发表于 2015-3-8 22:15
这个得看你的超离的机器和转头啊，我们医院这边的超离机子就两个转头，最大也只有30ml的离心管，不过一次 ...

请问那你们每30ml上清的离心产物最终重悬在多少PBS中？这样提取的外体浓度有多少？

作者: 晓庆妞87 时间: 2015-3-25 20:45

向荣y 发表于 2015-3-25 19:26
请问那你们每30ml上清的离心产物最终重悬在多少PBS中？这样提取的外体浓度有多少？ ...

150ml的上清提的，溶于200ul的PBS，最终浓度在0.6ug/ul左右

作者: nene 时间: 2015-3-30 14:12
20 mL实在是太少了。赞同200mL。
一般50 mL 比较好。

作者: luckkit 时间: 2015-3-31 11:17
检测汇报一下初步产量，Exo-free FBS培养48-72h,超离分离EXO,产量（80-100ml上清）大约0.6ug/ul（80ul PBS), 正准备用WB检测纯度

作者: 向荣y 时间: 2015-4-14 16:41

晓庆妞87 发表于 2015-3-25 20:45
150ml的上清提的，溶于200ul的PBS，最终浓度在0.6ug/ul左右

亲，浓度这么低，做下游的实验能有效果么？或者说这个浓度的外体可用来做那些誓言啊？

作者: yy8651 时间: 2015-4-14 20:40
有用试剂盒提取的吗？大家都是用超速离心提取的吗？

作者: luckkit 时间: 2015-4-15 13:31
再反馈一下，WB结果显示还不纯，GRP94阳性。

作者: luckkit 时间: 2015-4-16 08:25
超速离心正在改进中，待后续反馈。

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